糖基化修饰不仅影响着蛋白质的空间构象、生物活性、运输和定位，在分子识别、细胞通信、信号转导等特定生物过程中发挥着至关重要的作用。糖蛋白根据其糖链结构及糖基化位点主要有N-糖蛋白与O-糖蛋白两大类。据推断，有超过50%的蛋白质都发生了糖基化修饰，但由于糖基化的高度复杂性，绝大多数糖蛋白尚未被发现，现有数据库中只有约10%的蛋白质被注释为糖蛋白。仅仅由6个不同单糖组成的寡糖链，其结构就可能达到惊人的1012种。

技术原理

凝素亲和法是目前糖蛋白质组学中应用最广泛的分离富集方法。凝集素（lectin）是一类糖结合蛋白质，能专一识别某一特殊结构的单糖或聚糖中特定的糖基序列而与之结合，它们与糖链可逆非共价结合，糖蛋白或糖肽被凝集素捕获之后，通常用特定的单糖通过竞争结合凝集素将糖蛋白或糖肽洗脱下来。蛋白质经过酶解后利用凝集素（lectin）富集N-糖基化肽段，然后用N-糖酰胺酶（PNGase）在H218O中切除连接在天冬酰胺残基（Asn）上的糖链。该处理致使Asn分子量增加2.9890Da。最后用高精度LC-MS质谱仪检测脱糖后的肽段，并通过MASCOT软件检索数据库，确认脱糖后分子量与其理论分子量的变化以及糖基化修饰肽段的序列，从而确定该蛋白质的N-糖基化位点。N-糖基化位点确定之后，再利用label-free的原理对其进行定量分析。

技术优势

• 鉴定通量高，一次最高可检测上万个N-糖基化修饰位点；

• 多组学分析：可联合代谢组学进行机制+表型方向的研究。

应用领域

• 基础医学、临床诊断：生物标志物，疾病机理机制，疾病分型，个性化治疗等；

• 生物医药：药物作用机理，药效评价，药物开发等；

• 农林领域：抗逆胁迫机制，生长发育机制，育种保护研究等；

• 畜牧业：肉类及乳品质研究，致病机理研究等；

• 微生物领域：致病机理，耐药机制，病原体-宿主相互作用研究等；

• 海洋水产：渔业资源，海水养殖，渔业环境与水产品安全等；

• 生物能源、环境科学领域：发酵过程优化，生物燃料生产，环境危定风险评估研究等；

• 食品营养：食品储藏及加工条件优化，食品组分及品质鉴定，功能性食品开发，食品安全监检测等。

样品要求

• 组织类型：动物组织≥100mg、植物组织≥100mg、微生物≥20mg；

• 细胞样品：每样品细胞量 ≥ 1X10⁷

• 蛋白提取物：≥100µg

• 体液：血清/血浆≥200µL、尿液≥1ml、唾液/脑脊液≥1ml、泪液≥1mL、支气管灌洗液≥3ml；

• 外泌体：≥10µL

• FFPE石蜡包埋切片：≥0.3 mm * 0.3 mm

参考文献

[1]. Zielinska DF, Gnad F, et al. Mapping N-glycosylation sites across seven evolutionarily distant species reveals a divergent substrate proteome despite a common core machinery. Mol Cell. 2012; 46(4): 542-8.

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