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大肠杆菌被广泛用来表达那些不需要翻译后修饰如糖基化维持活性的蛋白质,然而大肠杆菌大量表达重组蛋白质常常导致其聚集并形成蛋白沉淀——包涵体。包涵体 蛋白没有生物活性,需要复杂的溶解,复性,纯化来得到有功能活性的产品。通常,要用高浓度的变性剂(尿素,盐酸胍)溶解包涵体,同时加入还原剂如β-巯基 乙醇,蛋白溶解后,在存在氧化剂的条件下通过缓慢去掉变性剂的方法来复性。
传统的包涵体复性方法的缺点:(1)用高浓度变性剂溶解包涵体将导致蛋白质二级结构丧失,这样将使肽链随机缠绕并使疏水表面暴露,而包涵体复性出有生物活 性的蛋白质效率低的主要原因是在溶解时失去了蛋白质二级结构,在复性的过程中变性的蛋白质相互缠绕聚集沉淀。(2)在很多时候,包涵体复性的回收率大概为 15-25%,其占有大肠杆菌生产重组蛋白的绝大部分费用。
RealGene采用本公司专利复性技术简化了蛋白复性程序,大大提高了蛋白复性的成功率及回收率。
服务优势
如果您需要,我们保证超过95%的包涵体均能溶解并折叠复性,提供给客户的复性后蛋白纯度为85%以上(zei终纯度根据含有包涵体的目的蛋白数量而定),并储存于特定缓冲液中。
瑞晶蛋白折叠复性服务的主要内容如下:
1.分析目标蛋白的理化性质
2.摸索包涵体蛋白温和溶解方法。
复性策略是根据蛋白的序列及结构性质决定的。一般来说,我们的方案包括以下几点:
瑞晶专利复性方法
直接稀释法
透析以及渗滤
色谱复性技术:SEC (体积排除色谱法), HIC (疏水相互作用色谱法), 亲和柱以及IEC (离子交换层析法)
交付信息:
1L表达体系中,我们可为客户提供纯度为85%、5mg可溶性复性蛋白。可溶性复性蛋白经过SDS-PAGE分析,用客户提供的测活方法测活验证,提供工作报告,蛋白放在特定的缓冲液中交付给客户。
蛋白折叠复性服务信息由上海瑞晶生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于蛋白折叠复性服务报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。
注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途