基因敲除（基因敲低）慢病毒载体设计包装

 KnockGene的慢病毒产品，能在mRNA、蛋白水平均满足您对敲低效率的要求。我们擅长RNAi、CRISPR等敲除、敲低技术。比如：KnockGene的单载体CRISPR等技术能省去一次不必要的繁琐筛选、单克隆筛选工作，为后续实验节约时间。这样的病毒用在原代细胞实验上，让您更加放心。好的载体，让您的后续实验高枕无忧。

我们可为您设计，有以下要求的载体：

u  过表达，调控表达（对表达量有比较严格的要求）

u  敲低，RNAi，CRISPR

u  稳定转染，永久转染，传代细胞转染，原代细胞转染，在体转染

u  单载体CRISPR

u  多基因表达，长ORF

u  组织特异性表达，靶向性转染，cell targeting

u  非整合型慢病毒

u  全实验过程中涉及多个筛选基因的设计

u  全实验过程中涉及多个报告基因的设计

u  基因治疗载体的优化

除了设计各种难以程度不同载体之外，我们也乐于为大家提供实验方面的咨询，分享我们团队十多年来在各类实验中积累的经验，帮助大家克服实验中遇到的问题。欢迎联系：18610598977  /  010-80765889

案例  原代造血干细胞中CRISPR基因敲除

客户需求：在分离的原代造血干细胞中，使用CRISPR技术敲除掉目的基因，并且要尽可能的花更少的时间完成这一目的。

难点：   CRISPR的慢病毒由于Cas9基因本身比较大，达到4100bp以上，因此通常是采用双病毒载体，一个载体表达Cas9，另一个载体表达sgRNA，对细胞转染两次以后才能完成基因敲除。对于原代造血干细胞来说，本身体外培养时间有限，前面两次转染和筛选会消耗大量的时间，使得后面没有足够的时间完成实验。有一些慢病毒载体可用于单载体CRISPR应用，例如常见的LentiCRISPRv2，但是这些载体包装的病毒滴度太低，通常只有10⁵TU/ml量级，对于本来难转的原代细胞就很麻烦。

结果：使用我们独有的单载体CRISPR，构建了两个靶点的病毒载体，并且包装病毒。初始滴度均能达到10⁶ TU/ml以上。浓缩以后能够成功的转染细胞，使用载体带有的puromycin抗性进行筛选，获得稳定转染敲除病毒的细胞。在转染后7天的时候取细胞进行WB分析，两个靶点均有效的完成了目的基因的敲除，分别达到70%和90%以上。此载体在不需要单克隆筛选的情况下即完成了基因敲除，使这些难于实现的实验变得可行。

北京科诺科服生物科技有限公司

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服务邮箱：knockgene@126.com

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途