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基因组文库(Genomic Library)构建

参考报价: 面议 型号: 基因组文库(Genomic Library)构建
品牌: 威斯腾 产地: 重庆
关注度: 57 信息完整度:
样本: 典型用户: 暂无
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基因组文库(Genomic Library)构建


简介:

用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。基因文库=基因组文库+cDNA文库 。  


载体的种类和特征:

 

受体细胞

结构

插入片段

举例

质粒

E.coli

环状

很小,<8kb

pUC18/19 ,T-载体, 
pGEM3z

λ噬菌体

E.coli

线状

9-24kb

EMBL,λgt系列

丝状噬菌体及噬菌粒

E.coli

环状

<10kb

M13系列

粘粒载体

E.coli

环状

35-45kb

 

BAC

E.coli

环状

约300kb

 

PAC

E.coli

环状

100-800kb

PCYPAC

YAC

酵母细胞

线性染色体

100-2000kb

 

MAC

哺乳动物细胞

环状

>1000kb

 

病毒载体

动物细胞

环状

 

SV40 载体,昆虫杆状病毒载体

穿梭载体

动物细胞和细菌

环状

 

pSVK3质粒,PBV,Ti质粒,

基因组文库构建步骤:

1、载体: 

噬菌体:48.5kb,插入型(最多可容纳9kb)、取代型(可容纳 38-51kb,最适19-20kb), EMBL, Charon 粘性质粒(Cosmid):4-6kb, 质粒+噬菌体的性质,可容纳大片段的外源基因,最多可容纳46kb。 
酵母人工染色体克隆体系(YAC,Yeast Artificial Chromosome  Cloning System) 插入大小200—1000kb 

2、载体DNA的制备: 高分子量的外源DNA 100-150kb
 载体DNA酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理 (常用BamHI)   (蔗糖密度梯度离心)  (碱性磷酸酶) 

3、连接和包装:外源片段与两臂之间的比例,包装蛋白 
4、感染宿主菌:选择合适的宿主菌,LE392, NM538, NM539, KW251等 
5、基因组文库的保存和扩增 
6、测滴度:106fu以上

7、保存:氯仿4℃,7% DMSO -70℃


客户提供: 

动物的血或细胞、新鲜植物叶片、活体昆虫或纯化好的DNA样品。

 

公司提供:

1、文库(10%甘油菌)以及菌落效价(CFU/ml);

2、随机抽样测序结果。


威斯腾实验服务流程


 

威斯腾生物服务项目

分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型

SILAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型


高血压模型
病毒包装实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化
肺炎大鼠模型


肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
BioPlex悬浮芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
生长因子芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
炎症因子芯片软骨细胞培养体内血栓模型
血管生成因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
凋亡因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
趋化因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片
基因编辑动物

电生理相关服务动物整体实验服务

膜片钳实验
细胞生物学检测高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验
条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验
全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验

病理检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光

Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研设计指导&文章评估/润色
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)
临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测药物筛选服务项目药效学评价
旷场实验高通量自动药物筛选平台抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测细胞高内涵药物筛选平台心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测蛋白质组学靶标研发平台泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳分子药理研究平台内分泌系统药物药效学评价

生物膜片钳药物筛选平台抗炎免疫药物药效学评价

常规药物体外筛选


【本平台合作项目】
 

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!



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