载体构建与病毒包装

 载体构建服务       

目前市面上不同公司提供的表达载体骨架多达数百种，如何选择确实令人困惑。Cyagen 把大部分的真核表达载体骨架归纳为7个体系，能够满足客户的几乎所有需求。Cyagen 强大的元件库配合灵活的组合方式，可拼接出多达1600 种载体类型，囊括了市场上所有真核表达体系，能够在任何真核细胞中同时表达多达4 条的目的基因，可控地表达这些基因，可携带任何一种标记蛋白和抗药性基因，还可以可控沉默任何基因！ 

1、慢病毒载体（Lentiviral Vector）

2、腺病毒载体（Adenoviral Vector）

3、逆转录病毒载体（Retroviral Vector）

4、普通表达载体（Regular Expression Vector）

5、增强子功能研究载体（pHsp68 LacZ Vector）

6、PiggyBac 载体（PiggyBac Vector）

Cyagen 多基因表达系统 
Cyagen 不仅提供单个基因表达载体构建服务，而且提供多基因表达载体构建服务。多基因表达的概念是指在一个启动子的驱动下两个（bicistronic ）或者两个以上（multicistronic ）的基因同时表达。多基因表达往往需要借助Linker 来帮助实现。Cyagen 的Linker 基因包括两种：Internal Ribosome Entry Site (IRES) 、2A 肽链(2A Peptide) 

Cyagen 诱导型表达载体系统（inducible expression） 
Cyagen 不仅提供组成型表达（constitutive expression ）载体构建服务，而且提供诱导型（inducible expression） 表达载体构建服务。诱导型表达是指在诱导型启动子的驱动下，例如TRE，需要rtTA 这样的转录激活因子和doxycycline 药物的存在下，才能表达下游的基因。

病毒包装服务

 Cyagen目前提供腺病毒、慢病毒与逆转录病毒表达系统，包括载体构建与病毒包装。您可以根据实验需要，选择合适的载体系统。

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一、慢病毒系统 
        慢病毒（Lentivirus ）载体是以HIV-1 （人类免疫缺陷I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，因此它可以有效地感染包括神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等在内的几乎所有的哺乳动物细胞，并且感染效率非常高，是传统方法的数倍甚至数十倍。慢病毒可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达，是目前zei受欢迎的基因功能研究工具。慢病毒的研究发展很快，也很深入，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，预示着慢病毒有着广阔的应用前景。

Cyagen 慢病毒系统组成 
1、一个表达载体，含有目的基因、目的基因的启动子以及其它病毒包装所需的必要元件；
2、一套包含三个辅助质粒的包装质粒Mix，分别表达产生病毒所需的结构蛋白和逆转录酶；
3、293FT 细胞株，能够在表达载体和包装质粒mix 共转染后包装出慢病毒。

系统优势 
1、生产出以HIV-1 为基础的慢病毒，它能有效地转导分裂和非分裂的哺乳动物细胞，因此它的应用潜能超过传统的以MLV 为基础的逆转录系统。
2、无论靶细胞是在体内还是体外培养，慢病毒都能有效地将外源基因携带进去。相比传统腺病毒的瞬时转染，慢病毒能够将目的基因整合到宿主基因组，从而能够长期稳定地表达。
3、宿主非常广泛，包括人、猩猩、小鼠、大鼠、兔、狗等所有已经研究过的哺乳动物。
4、表达载体和包装质粒形成反式互补，且包装质粒又分别由三个质粒构成，, 从而为安全性提供了更加可靠的保障。

Cyagen 可选的载体元件列表 
        Cyagen 的载体元件库可以为您提供包罗万象的载体元件，包括大家熟悉的广泛表达启动子，也包括丰富的组织特异性表达启动子、各种颜色荧光标记基因、化学发光标记、色度法筛选基因、正负筛选基因、可诱导的rtTA 基因、双顺反子，标签蛋白等，均可根据您的要求进行选择。

二、腺病毒系统 
        采用Cyagen Adenoviral Expression System 生产出的腺病毒，它既能把外源基因携带进分裂细胞表达，又能把外源基因携带进非分裂细胞表达。

系统组成： 
1、一个表达载体，含有目的基因、目的基因的启动子以及一些把这个载体包装进病毒的元件；
2、293A 细胞株，能够在表达载体转染后包装出腺病毒；

系统优势： 
1、宿主范围广 -腺病毒可感染种类广泛的有丝分裂后期细胞；
2、包装容量大 -包装容量可以达到6 kb；
3、病毒滴度高 -病毒活性滴度达到1011 PFU/mL。

三、逆转录病毒载体系统 
系统组成： 
1、一个含有目的基因的表达载体；
2、一个编码VSV-G 的辅助质粒；
3、表达gag/pol 的辅助质粒；
4、293T 包装细胞。

系统优势： 
1、转导效率高，能够有效提高基因的转染率；
2、相对于腺病毒来说，能够稳定整合到细胞的基因组中，能够稳定遗传。

四、shRNA 慢病毒技术服务

        Cyagen 的 shRNA 慢病毒载体是由U6 启动子驱动shRNA 实现，并连接了eGFP，可以实时监测载体的转染效率，同时还包含Amp 抗性基因，可以无限制扩增。

 

shRNA 慢病毒系统作用示意图

设计shRNA 靶序列 
         一般情况下，Cyagen 将根据客户的目的 mRNA 靶基因，分别设计 3 条不同的shRNA 序列，shRNA 序列一般为 19 - 21bp 长。也可以按照客户的要求来设计，由客户确定shRNA 序列的长度。 对于每条选定的靶序列，设计正义链和反义链，以 loop(9nt ) 相连，合成shRNA（short hairpin RNA）。

shRNA 慢病毒载体构建 
         Cyagen 可为客户合成shRNA、双酶切shRNA 空载体、连接与转化、测序鉴定、载体制备及定量。

shRNA 慢病毒包装 
         Cyagen 可将构建好的shRNA 慢病毒载体包装成具有高转染效率的慢病毒，并提供病毒滴度检测服务。

实验结果 
         携带shRNA 的慢病毒载体、慢病毒及测序结果等。

优点 
     1、长时间抑制靶基因的表达，可持续数周；
     2、相对其他RNAi 方法，成功率高，而且knockdown 更彻底；
     3、在Tet-on 系统中可诱导抑制靶基因的表达；
     4、用shRNA 慢病毒载体，大大提高了转导率。

shRNA 慢病毒干扰案例

五、Cyagen三套病毒系统比较

载体构建与病毒包装信息由赛业（广州）生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于载体构建与病毒包装报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途