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CRISPR慢病毒包装

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AI问答
可以做哪些实验,检测什么? 可以用哪些耗材和试剂?

 

CRISPR慢病毒系统

 
CRISPR慢病毒为纯化慢病毒,高纯度可直接用于动物体内实验,感染效率高。

 
 

CRISPR慢病毒系统包括两个载体:

1)gRNA慢病毒载体

 

gRNA慢病毒载体由慢病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUCori。慢病毒基因组序列是从元件5’LTR开始,到3’LTR结束。


慢病毒基因组序列可容纳两个外源基因表达盒子:一个是目的基因表达盒子,另外一个是marker基因表达盒子。Marker基因表达盒子已经克隆在载体上,无需重新构建。我们提供了荧光marker、抗药性marker或者荧光/抗药性双marker供您选择。gRNA表达盒子则包括三部分序列:U6启动子、gRNA和终止子。U6启动子已经克隆在载体上,每次构建载体,只需通过annealing-ligation技术将感兴趣的gRNA打靶序列克隆到载体上即可。gRNA打靶序列与gRNA scaffold序列构成一个完整的gRNA。
 

克隆方法

我们采用引物退火连接的克隆方法,将gRNA克隆到慢病毒骨架上。

我们的CRISPR/Cas9慢病毒载体使用了human U6 promoter转录gRNA。gRNA被Cas9识别,与基因组序列结合,从而引起Cas9对基因组序列的剪切。剪切效率取决于gRNA 是否只与目标基因组序列特异性100%匹配。目标序列的选择还需要考虑下游有PAM特征的序列。您可以登陆vectorbuilder.com选择感兴趣的人、小鼠和大鼠的9RNA进行载体设计。
 

2)Cas9慢病毒载体

Cas9慢病毒载体利用CBh启动子共表达humanized Cas9基因和Hygromycin抗药性基因。gRNA慢病毒载体利用U6 promoter表达gRNA,同时携带了一个表达抗药性基因的基因表达盒子。在设计gRNA慢病毒载体时,请选择非Hygromycin抗药性基因(Puromycin、Neomycin和Blasticidin),两个载体需要不同的抗药性基因配套使用才能起到药筛的效果。

 

质量控制

我们会对每一个CRISPR/Cas9慢病毒载体挑克隆,并测序gRNA片段。测序正确后,再进行酶切鉴定,酶切鉴定合格后交付。
 
 

服务明细

 

CRISPR慢病毒包装信息由赛业(广州)生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于CRISPR慢病毒包装报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。

注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途

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