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DNA甲基化检测技术服务—HRM法

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DNA甲基化检测技术服务—HRM
 
DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, DNMT)催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作为甲基供体,将胞嘧***转变为5-甲基胞嘧***(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧***是唯一存在的化学性修饰碱基。DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式,能在不改变DNA序列的前提下,改变遗传表现。一般说来,DNA的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记和肿瘤的发生发展都起重要的作用。
    HRM法原理:用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧***(C)被转化为5-甲基胞嘧***(mC)(即尿嘧***(U))而甲基化的胞嘧***则不变。在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物,这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若这些CpG岛发生了甲基化,用亚硫酸氢盐处理后,则未甲基化的胞嘧***经PCR扩增后转变成胸腺嘧***,而甲基化的胞嘧***不变,样品中的GC含量发生改变,从而导致熔解温度的变化(图1)。


                                         图1 不同甲基化程度的样品(0%到100%)的HRM熔解曲线
 
服务内容
1. 基因组DNA的Bisulfite转化。
2. DNA甲基化检测——基于HRM(High Resolution Melting,HRM)法。
3.本公司所用试剂全为进口试剂,实验全程质量保证。

样品要求
   细胞(≥106 个)、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,基因组DNA(体积≥50μl,浓度≥50 ng/μl)。
 
终产品
·Bisulfite处理的基因组DNA;
·扩增曲线、熔解曲线;
·实验报告。

服务周期
1~2周

服务说明
关于引物    在基于Bisulfite 转化的DNA甲基化检测的方法中,引物是实验成功的关键因素,且因检测的目的基因片段的不同,合适引物的存在与否有较大的不确定性,请尽量采用经过验证的引物,如需DNA甲基化检测引物设计服务,价格另议。

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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途

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