酵母蛋白表达系统

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金斯瑞利用基因改造型酵母可以使表达蛋白糖基化，可制备与哺乳细胞系统性质相同的表达蛋白，生产出的蛋白在人体治疗中具有很强的适应性。此外该表达系统可稳定的表达那些在其它表达系统中无法得以表达的蛋白。

毕赤酵母蛋白表达服务标准

服务内容及流程：

1.将客户要表达的蛋白基因克隆到酵母表达载体，客户可以选择分泌表达（pPICZaA 和pGAPZaA）或胞内表达（pPICZA 和pPIC3.5K）。

2.将构建好的质粒转化酵母宿主菌，毕赤酵母或啤酒酵母。

3.PCR鉴定转化子，选择阳性转化子进行蛋白表达鉴定。

4.可以依据客户的要求，增加多拷贝转化子的筛选以及蛋白表达优化两项服务内容。

5.根据客户要求纯化重组蛋白。

6.小试通常指从1 L 培养物中纯化重组蛋白，产率视表达的蛋白而定。

客户提供信息：

◆ 表达蛋白的基因序列。

◆ 蛋白的基本特性（蛋白来源为分泌蛋白还是胞内蛋白，天然蛋白是否糖基化，蛋白是否稳定，蛋白的pI等)。

◆ 表达系统的选择（胞内或胞外，选择胞外一般克隆pPICZaA和pGAPZaA两个载体，选择胞内一般克隆pPICZA和pPIC3.5K，如有特殊要求，请注明）。

◆ 要纯化蛋白的量，纯度（及其鉴定方法，通常是SDS-PAGE）,tag信息。

◆ 发货的具体要求：如缓冲液要求，冻干等。

◆ 如果客户提供表达载体，应提供载体相关信息和克隆方法。

服务价格：

我们一次收费内容只包含表达载体的构建，一次电击转化，阳性转化子的筛选，表达鉴定以及1L酵母纯化蛋白。客户需要进行多拷贝转化子的筛选需要增加相应的费用。

服务发货形式：

1. 拿到表达质粒后，用相应的内切酶对质粒进行线性化，电击转化两个酵母宿主菌（SMD1168和GS115，如对宿主菌有特殊要求，请注明），转化后，我们将分别挑取10个以上的转化子进行PCR鉴定，筛选阳性转化子。

2. 挑选5个阳性转化子进行表达鉴定（SDS-PAGE或Western Blot）。鉴定表达的转化子我们会挑选表达情况好的，按照客户的要求进行1L的放大培养与表达纯化。

3. 鉴定所有的阳性转化子都不表达，我们会重新挑选一批阳性转化子进行表达鉴定（客户可以要求重新做转化，但这需要增加相应的时间和费用）。

4. 阳性转化子的判断依据是设计引物对转化子粗提DNA，转化质粒（阳性对照），宿主菌和水（阴性对照）进行PCR扩增，扩增结果显示转化子与阳性对照扩增片段大小一致，阴性对照没有相应的条带。蛋白表达不表达依据阳性转化子与阴性和阳性控制（转空载体为阴性控制，转已鉴定表达的GST基因为阳性控制）表达情况的比较进行判断。

5. 客户可以要求进行多拷贝转化子的筛选，我们会将筛选的阳性克隆接种到含不同抗生素浓度的筛选培养基上，挑取耐药性浓度不一样的克隆进行表达。

6. 客户还可以要求表达条件的优化，我们优化的内容主要有：pH（3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0），温度（23℃和30℃），甲醇诱导浓度（2%, 1%和0.5%），客户可以根据自己表达蛋白的特性提出相应的要求。 7. 自收到亚克隆起，30个工作日内发货。如遇特殊情况，我们会及时与客户联系，保证尽早发货。此外，客户需要增加多拷贝转化子的筛选及表达优化的，分别需要增加1个星期的交货时间。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途