杆状病毒-昆虫细胞蛋白表达系统

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  杆状病毒-昆虫细胞蛋白表达系统(BEVS)凭借其简易的流程、高表达水平及翻译后修饰功能而被普遍认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具。金斯瑞杆状病毒-昆虫细胞蛋白表达系统包括病毒制备和大规模的蛋白制备，并为制药公司、生物技术公司和学术研究机构提供相应服务。

昆虫细胞蛋白表达服务标准

服务内容：

1. Bac-to-Bac表达系统：将客户提供的基因序列克隆到pFastBac系列载体，转化DH10 Bac菌，PCR鉴定重组Bacmid，选择重组Bacmid转染昆虫sf-9细胞，进行病毒扩增 、蛋白表达鉴定以及蛋白纯化。此外，可以依据客户的要求，增加单克隆病毒的筛选、生产高滴度病毒（1~5×10⁸）、病毒滴度测定及蛋白表达优化（细胞系优化，MOI优化及收集时间优化）等服务内容。

2. 共转染：将客户提供的gene construct与线性病毒进行共转染，得到重组病毒，进行病毒扩增，蛋白表达鉴定以及蛋白纯化。此外，可以依据客户的要求，增加单克隆病毒的筛选、生产高滴度病毒（1~5×10⁸）、病毒滴度测定及蛋白表达优化（细胞系优化，MOI优化及收集时间优化）等服务内容。

客户提供信息：

◆ 载体的选择

◆ 表达蛋白的基因序列

◆ 发货的具体要求

◆ 蛋白的基本特性（蛋白来源为分泌蛋白还是胞内蛋白，天然蛋白有没有糖基化，蛋白是否稳定，蛋白的pI等)

服务价格：

1. Bac-to-Bac表达系统：我们一次收费内容只包含表达载体的构建，重组Bacmid的筛选，表达鉴定以及1L昆虫细胞纯化蛋白。若表达的蛋白需要用除His及GST抗体之外的抗体进行检测，客户需自行提供或增加费用；客户若需要滴度1~5×10⁸pfu/ml的病毒，需要增加相应的费用。若客户对蛋白量、纯度及Tag去除有更高的要求，则需要增加相应的费用。客户要求进行表达优化，需增加相应费用。

2. 共转染：由于共转染需要购买试剂盒，共转染的订单价格应在应有的价格上加上试剂盒的费用。基本收费内容只包含表达载体的构建，重组Bacmid的筛选，表达鉴定以及1L昆虫细胞纯化蛋白。若表达的蛋白需要用除His及GST抗体之外的抗体进行检测，客户需自行提供或增加费用；客户若需要滴度1~5×10⁸pfu/ml的病毒，需要增加相应的费用。若客户对蛋白量、纯度及Tag去除有更高的要求，则需要增加相应的费用。客户要求进行表达优化，需增加相应费用。

服务发货形式：

1. Bac-to-Bac表达系统：收到定单后，我们将客户提供的基因序列克隆到适当的载体中，我们会提供测序报告证明目的基因克隆准确无误。拿到质粒后，转化大肠杆菌DH10 Bac，转化后,我们将挑选3个克隆进行PCR鉴定，筛选重组Bacmid。得到重组Bacmid后，我们将转染sf9细胞。在收集P0代病毒后会扩增P1及P2代病毒，并对蛋白的表达情况进行分析。重组Bacmid的判断依据是用M13通用引物对转化的Bacmid，阳性对照（TGF-beta重组Bacmid），阴性对照（Bacmid alone）进行PCR扩增，扩增结果显示重组Bacmid的条带大小应为~2300bp加上相应的基因大小，阳性对照及阴性对照都有相应的条带。蛋白表达不表达依据是对P0，P1，P2代的Cell pellet进行SDS-PAGE及Western blot分析，看是否有目的蛋白表达。Western blot分析的依据在于看阳性控制是否有对应的条带，而阴性控制（用空病毒感染的细胞）则没有目标蛋白的条带。得到蛋白表达的数据后，将生产一升的感染细胞进行蛋白纯化。蛋白的得率为100μg~2mg，纯度为65%，Tag标签不去除发货时提供客户所需的蛋白，10ml P2病毒，质粒及其测序结果，实验报告。 主菌有特殊要求，请注明），转化后，我们将分别挑取10个以上的转化子进行PCR鉴定，筛选阳性转化子。

 2. 共转染：收到订单后，将客户提供的gene construct与线性化病毒进行共转染，所选用的细胞株为sf9。得到P0代病毒后，扩增P1及P2代病毒，并对蛋白的表达情况进行分析蛋白表达不表达依据是对P0，P1，P2代的Cell pellet进行SDS-PAGE及Western blot分析，看是否有目的蛋白表达。Western blot分析的依据在于看阳性控制是否有对应的条带，而阴性控制（用空病毒感染的细胞）则没有目标蛋白的条带。得到蛋白表达的数据后，将生产一升的感染细胞进行蛋白纯化。蛋白的得率为100μg~2mg，纯度为65%，Tag标签不去除发货时提供客户所需的蛋白，10ml P2病毒，质粒及其测序结果，实验报告。

3. 自收到亚克隆起，45个工作日内发货。如遇特殊情况，我们会及时与客户联系，保证尽早发货。此外，客户需要表达优化及对蛋白量及表达纯度有更高要求的的，分别需要增加1个星期的交货时间。