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实验动物的遗传质量对动物实验结果有重要影响。近交系小鼠是医学生物学研究中广泛应用的实验动物,其本身的质量尤其是个体基因的纯合性与不同个体遗传一致 性对实验结果的可比性、可重复性和准确性起着决定性作用。随着生物医学的发展,无论是学术界还是生物技术产业界,对实验动物质量的要求越来越高。
1. 技术原理与实验流程
1.1遗传位标的选择
在小鼠基因组上挑选45个SNP位点,针对各SNP位点侧翼进行引物和探针设计。
1.2技术原理--高通量PCR-LDR分型
高温连接酶检测反应技术是一种成熟的SNP分型检测方法。其原理是高温连接酶检测到模板DNA与两条探针DNA的接头处存在着碱基错配,则连接反应不能进行。针对这45 SNP位点,将其分成4组,每组进行多重PCR-LDR分型。
2实验结果及分析
2.1测序仪检测结果
PCR-LDR 产物测序仪检测结果如图4,从图中可见,分型信号清晰唯一,无杂信号的干扰。此外,对部分位点经sanger测序验证,分型准确度为100%。
3 服务流程
3.1 标准服务流程
1)客户沟通,确认检测小鼠品系以及样本数,提示实验可行性。
2) 建立实验方案,并在此过程中和客户保持密切沟通。
3) 大规模实验,有严格的指控流程保证实验结果可靠
3.2 实验数据质量控制流程
1) 所有分型信号要求信号清晰唯一,排除不确定信号干扰。
2) 每板数据中都有阴性对照,质控PCR和LDR污染数据。
3) 整个实验服务流程有15%的双盲重复对照,保证数据准确可靠。
上海翼和应用生物技术有限公司
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