钙离子的测定
关键词: 钙离子来源: 互联网
【求助】钙离子的测定
参与者:99shaoshuai
请问各位师兄,师姐,用Fura-2/AM标记,荧光双波长测细胞内钙离子浓度时,悬浮细胞时,悬浮液里含不含Ca2+,Mg2+离子?如果含Ca2+,Mg2+离子的话,会不会影响细胞内钙离子的测定?为什么?非常感谢!
参与者:yangchunzhang1
AM基团可以特异的标记细胞内游离钙离子,因而不用担心外液的影响。具体机制请参照染料的说明书。
没有AM基团的Fura-2一般用于显微注射,对细胞的要求比较高。
参与者:laugh
测样品时悬液一般采用生理浓度的钙离子(大约1mM),因为细胞外液钙离子浓度会影响细胞内液钙离子浓度,特别是细胞膜是细胞膜上钙离子通道比较丰富的细胞,比如血小板、肌细胞等。在测最小值应用不含钙离子的溶液并加EGTA尽可能去除细胞外钙,测最大值时用含钙液并加TritonX100使细胞外钙充分进入胞内。
参与者:99shaoshuai
谢谢谢谢
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