聚蔗糖-泛影葡胺法分离嗜碱性粒细胞
关键词: 分离 嗜碱性粒细胞 聚蔗糖-泛影葡胺法来源: 互联网
[试剂及配制]
(1)聚蔗糖-泛影葡胺分层(D=1.085)
(2)HEPES-ACM缓冲液:HEPES25mmol/L中含CaCl21mmol、NaCl130mmol、KCl5mmol、MgCl21mmol,用1mol/LNaOH调节至pH7.4。
(3)无Ca2+、Mg2+Hank’s液
[操作方法]
(1)取肝素抗凝血3ml,与等体积的HEPES-ACM缓冲液混匀后,叠加在3ml密度为1.085的分层液上,2000r/min离心20min。
(2)吸取中间层白细胞,用无Ca2+、Mg2+Hank’s液洗2次,每次1200r/min离心10min。弃上清,
(3)调整细胞浓度,涂片染色计数,嗜碱性粒细胞纯度大于90%。
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