PFEG（Plused-Field Gel Electrophoresis）技术是将细菌完全包裹在一种特殊的琼脂中，然后加入一些化学试剂，比如十二烷基肌氨酸钠，蛋白酶K等，将细菌中的蛋白成分全部溶化，消化，只剩下整个序列的DNA。经稀有限制性内切酶消化后，切割成大小不等的片断，然后将其置于脉冲场电泳槽中电泳，完成片段分离的过程。

经染色脱色后，在读胶仪上显现酶切后的电泳图谱，并经统计软件的分析，即可判断出条带的不同，同时做出细菌的同源性分析，从而达到分型的目的。其中能影响电泳图谱的参数很多，如电泳的转换时间，电泳的总时间，电泳的角度，电压，电泳液的温度等等，且不同的参数会得到不同的电泳图谱。

Pulsed Field Gel Electrophoresis Short Protocol

1. Reagents

1.1 Tris-EDTA Buffer （10mM Tris： 1mM EDTA， pH 8.0）.

- 10ml of 1M Tris， pH 8.0

- 2ml of 0.5M EDTA， pH 8.0

- Dilute to 1000ml with molecular grade water.

1.2 Cell Suspension Buffer （CSB）. （100mM Tris：100mM EDTA， pH 8.0）.

- 10ml of 1M Tris， pH 8.0

- 20ml of 0.5M EDTA， pH 8.0

- Dilute to 100 ml with molecular grade water.

1.3 InCert agarose for plugs （1.6% InCert： 1% SDS agarose in TE）.

- Weigh 0.8g InCert agarose into a 250 ml screw-cap flask

- Add 46.7 ml TE Buffer； swirl gently to disperse agarose.

- Microwave for 30 sec.， mix gently and repeat for 10 sec.

- Place flask in 55-60℃ water bath for 5 min before adding SDS.

- Add 2.5 ml of 20% SDS and mix well.

- Keep at 55-60oC water bath until ready to use.

1.4 Cell Lysis Buffer （50mM Tris：50mM EDTA， pH， 8.0 + 1% Sarcosine）.

- 25 ml of 1M Tris， pH 8.0

- 50ml of 0.5M EDTA， pH 8.0

- 50ml of 10% N-Lauryl Sarcosine.

- Dilute to 500 ml with sterile type 1 water.