生物安全实验室HEPA滤器滤除率的生物检测验证     生物安全实验室排风口安装的HEPA滤器的物理检测不能够真正反映出其对微生物气溶胶的滤除效果(率)，只有通过生物学检测验证，才能真正表明安装的HEPA滤器对微生物气溶胶的滤除效果，这种滤除效果反映的是安装到位的HEPA滤器，不是单独一个HEPA滤器的效果，生物学检测验证的结果包括三方面的防护效果，一是HEPA滤器对微生物气溶胶的滤除效果；二是能够反映出安装过程中对HEPA滤器有没有损伤；三是反映出HEPA滤器安装的是否严密，不漏气。因此，在对生物安全实验室排风口HEPA滤器物理检测完毕后，必须用经确认得生物学方法进行检测验证。    生物安全实验室排风口HEPA滤器生物学检测验证主要包括以下几个步骤：检查实验室是否处于正常工作状态；本底采样；发生指示微生物气溶胶和指示微生物气溶胶本底的采样；一级和二级HEPA滤器后的空气样本的采集；采集样本的培养计数和计算HEPA滤器的滤除率。    (一)检查实验室是否处于正常工作状态    每一个BSL-3实验室、ABSL-3实验室、BSL-4实验室和ABSL-4实验室的负压、每小时换气次数都是不同的．但必须满足GBl9489-2004规定的最低要求。因此，在对BSL-3实验室、ABSL-3实验室、BSL-4实验室和ABSL-4实验室进行生物学检测验证之前，应向该实验室的主管询问了解实验室的负压、每小时换气次数，同时，要求启动运行实验室，使其处于正常运行状态。检查实验室是否处于设定的正常工作状态，可以通过以下两个途径：    1．观察该实验室的自动控制系统，确认实验室的清洁区、半污染区、污染区和缓冲间的负压值是否正常。    2．实际观察实验室的清洁区、半污染区、污染区和缓冲间人口处安装的负压指示表的负压值是否正常．观察在关闭所有门5min后的负压稳定性，并记录。    (二)本底采样本底采样包括实验室的半污染区和污染区的空气本底和过滤后空气本底的采样，本底采样的目的是为了防止出现本底阳性对检测结果的影响。1，用Andersen-2级空气微生物采样器采集实验室的半污染区和污染区的空气本底样品，采样时间为10rain；    2，用Andersen-2级空气微生物采样器采集排风口一级和二级HEPA滤器后的空气本底，采样时间为10rain。    (三)发生指示微生物气溶胶和指示微生物气溶胶本底的采样    发生指示微生物的选择是非常重要的，进行细菌气溶胶检测验证的指示细菌有粘质沙雷氏菌和枯草芽孢杆菌两种；进行病毒气溶胶检测验证的指示病毒有耻垢分枝杆菌噬菌体和大肠杆菌f2噬菌体两种。采样方法为：    1。实验室保持正常工作状态；    2．用微生物气溶胶发生器指示微生物气溶胶，98％气溶胶粒子的粒径<5gm；    3．在发生指示微生物气溶胶10min后，用Andersen-6级空气微生物采样器采集本底，采样时间为lmin。    (四)一级和二级HEPA滤器后的空气样本的采集    在一级和二级HEPA滤器后采集空气样本的采样器位点最好距离HEPA滤器50～100cm，采样器的采样口正对过滤器的中心。采样器用Andersen-2级空气微生物采样器，采样时间为10min。    (五)采集样本的培养计数和计算HEPA滤器的滤除率    采集的空气样本的培养时间和温度，根据所用的指示微生物的种类而定。根据培养出的菌落数或空斑数、采集流量和采样时间，计算出空气中指示微生物浓度。