PCR-RFLP HLA结果分析
关键词: PCR-RFLP HLA 结果 分析来源: 互联网
DR1纯合子样本各种等位基因的PCR-RFLP带型:
DR1等位基因组合 | 限制性核酸内切酶 | |
Ava II | Pst I | |
0101/0101 | 1 | 1 |
0102/0102 | 1 | 0 |
0103/0103 | 0 | 1 |
0101/0102 | 1 | 2 |
0101/0103 | 2 | 1 |
0102/0103 | 2 | 2 |
0:无酶切位点; 1:一个酶切位点; 2:2个酶切位点(杂合子)
注意事项和经验总结:
1. 上述介绍的分型方法是用于HLA-DRB1高分辨率分型的PCR-RFLP技术,即已知DR型别样本的亚型鉴定,如果用该方法进行HLA-DR杂合子的亚型鉴定,其RFLP带型十分复杂,通常需要借助于计算机软件进行结果判断。
如果进行其他HLA基因或者中分辨率分型,虽然操作过程类似,但必须改变实验条件(包括引物、扩增条件、限制性核酸内切酶的选用、结果解释等)。
2. 用限制性核酸内切酶酶切PCR扩增产物时,可能出现酶切不完全,造成结果分析困难和错误。应采用相应核酸内切酶识别位点阳性的DNA作为对照,及时发现其中的问题并予以解决。
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