结缔组织染色实验——胶原蛋白、弹力蛋白和黏蛋白染色

2019年4月06日 22:42:41 来源: 互联网
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实验方法原理

黏蛋白是多糖与蛋白质结合的复合物,组织内含有硫酸根等成分,带有酸性物质,可称为酸性黏液(黏蛋白)。弹力纤维中的弹性蛋白由一种凝胶状的肽链组成,通过非极性吸附显色。胶原纤维是由纤维母细胞产生的一种胶原蛋白铰链而成,易与酸性染料结合。经过组合染色后,可分别显示胶原蛋白、弹力蛋白和黏蛋白成分。

实验步骤


阿尔辛蓝染色液:阿尔辛蓝(Alcian blue 8 GS,由上海试剂三厂生产)1 g,冰醋酸 3 ml,蒸馏水 97 ml。


间苯二酚-复红染色液:间苯二酚 2 g,碱性复红 2 g,蒸馏水 400 ml,30% 三氯化铁 3 ml,盐酸 2 ml。先将间苯二酚、复红和蒸馏水混合搅拌均匀,煮沸后加入三氯化铁,再煮沸搅拌 3~5 min,冷却后过滤。将滤纸上的沉淀物一起放在隔水式恒温箱中烤干,取出放入烧杯中,并加入 95% 乙醇 200 mU 放在水浴锅内加热搅拌溶解,取出滤纸,盛于棕色试剂瓶内,再补 20 ml 的 95% 乙醇,最后加入盐酸 4 ml,混合使用,室温下保存。


1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。


2. 95% 乙醇浸洗 2 次,浸入间苯二酚-复红染色液内 1 h 左右。


3. 直接用 95% 乙醇快速分化 2 次,浸入蒸馏水内 1 min。


4. 阿尔辛蓝染色液染色 15 min,蒸馏水洗 2 次。


5. 用 3% 乙酸液浸泡 1 min,蒸馏水洗 2 次。


6. 滴染丽春红-苦味酸染色液 3 min。


7. 无水乙醇脱水、二甲苯透明和中性树胶封固。

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注意事项


1. 间苯二酚-复红染色液装入试剂瓶中,将瓶口塞紧,放在冰箱内保存。


2. 丽春红-苦味酸染色后,迅速脱水、过滤纸吸干,透明和封固。

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结果:黏蛋白呈绿色,弹力蛋白呈紫色,胶原蛋白呈红色,背景呈淡黄色。


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