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蛋白质染色介绍

2020.9.08

染色液种类繁多,各种染色液染色原理不同,灵敏度各异。使用时可根据需要加以选择。常用的染色液有:

1.氨基黑10B(amino black 10B又称为amidoschwarz 10B或naphthalene blueblack,2B 200)氨基黑10B分子式为C22H13N6S3Na3,MW=715,λmax=620-630nm,是酸性染料。其磺酸基与蛋白质反应构成复合盐,是最常用的蛋白质染料之一,但对SDS-蛋白质染色效果不好。另外,氨基黑10B染不同蛋白质时,着色度不等、色调不一(有蓝、黑、棕等);作同一凝胶柱的扫描时,误差较大。

2.考马斯亮蓝R250(coomassie brilliant blue R250,简称CBBR250或PAGE blue83)


考马斯亮蓝R250的分子式为C14H44O7H3S2Na,MW=824,λmax=560-590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。该染料是通过范德瓦尔键与蛋白质结合,尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色,但蛋白质浓度超过一定范围时,对高浓度蛋白质染色不合乎Beer定律,作定量分析时要注意这点。

3.考马斯亮蓝G250(简称CBBG250或PAGE blue G90,又名xylene brilliant cyanin G)

考马斯亮蓝G250比CBB R250多二个甲基。MW=854,λmax=590-610nm。染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍。其优点是在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地使蛋白质染色而几乎无本底色,所以常用于重复性好和稳定的染色,适于作定量分析。

4.银染色法

此法是Switzer.R.C和Merril.CR首先提出的,它较CBB R250灵敏100倍。但染色机制

尚不清楚,可能与摄影过程Ag+的还原相似。其灵敏度很高,牛血清为4×10-5μg/mm2,即清蛋白为8×10-5μg/mm2,cyt C为1.7×10-4μg/mm2,因此也常用于凝胶电泳蛋白质染色。


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