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正常细胞常规核型的标本制备实验

2019.11.12

微量全血培养
人淋巴细胞染色体标本制备
肿瘤细胞的染色体标本制备
人体染色体常规核型的分析

实验方法原理	采用微量全血培养人体外周血中淋巴细胞，在淋巴母细胞分裂高峰时加入秋水仙素，破坏细胞纺锤体的形成，使细胞停止在分裂中期。然后收集细胞，低渗处理，使细胞胀大，染色体伸展。接着进行固定并除去中期分裂相中残存的蛋白质，使染色体清晰且分散良好。再结合离心技术去掉红细胞碎片，然后采用空气干燥法制片获得中期染色体标本。
实验材料	外周血
试剂、试剂盒	640培养液肝素溶液秋水仙素胰蛋白酶 EDTA PHA KCl 甲醇冰醋酸 Giemsa原液磷酸缓冲液生理盐水
仪器、耗材	超净台镊子离心机水浴箱天平离心管显微镜载玻片平皿
实验步骤	1. 打开超净台紫外灯20~30分钟。 2. 洗手、换洁净白大衣后进入操作室。启动超净台，点燃煤气灯。 3. 用75%酒精棉球擦洗手、各种试剂瓶及操作台面，然后将培养液及肝素、秋水仙素、PHA等所需溶液移入超净台。 4. 在超净台内将每个培养瓶装入5 ml 培养液及0.2 ml PHA溶液，封好备用。 5. 用5 ml 注射器，7号针头，先吸取少许肝素湿润针筒，然后从肘静脉抽血1~2 ml。 6. 每个培养瓶接种全血0.2 ml 左右轻轻摇动使血和培养液混匀。 7. 在培养瓶上标记好供血者姓名、性别、采血日期等，放入培养箱中37℃培养。 8. 每天轻轻震荡培养瓶二、三次，防止血球沉积并保证血细胞与培养液充分接触，促进细胞生长繁殖。
注意事项	试剂配方 500 单位／ml 的肝素溶液 10μg／ml 的秋水仙素溶液 0.25％胰蛋白酶一 0.02％EDTA 混合消化液 0.5mg／ml 的 PHA 溶液 0.075mol／L 的 KCl 溶液磷酸缓冲液（pH6.8）
其他	1.人体外周血中淋巴细胞是成熟的免疫细胞，正常情况下处于 G。期不再增殖。PHA（Phytohemagglutinin，植物血凝素）是人和其它动物淋巴细胞的有丝分裂刺激剂，它能使处于 G0 期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，进入细胞周期开始旺盛的有丝分裂。 2.人体染色体常规核型的分析，在今天的染色体研究水平上作为染色体结构异常的疾病诊断已经失去意义，但对染色体数目异常仍具有诊断上的价值，尤其是起着分析其它几种显带核型的桥梁作用。通过常规核型的分析必须掌握三点：（1）会分组；（2）了解各组染色体的基本形态特征；（3）会计数数目和鉴定性别。