层析技术的应用（六）
（五）聚焦层析法
聚焦层析是一种操作简单、廉价的层析技术。它的原理是根据各种蛋白质的等电点不同进行分离的过程，因此本方法具有高分辨、高度浓缩和高度专一等特点。聚焦层析所用的凝胶首先用高pH溶液平衡，然后用多元缓冲液进行洗脱，多元缓冲液pH呈梯度下降。
聚焦层析所用凝胶主要有两种：MONOP和多元缓冲液交换剂（PBE）。其中MONOP是带孔小珠，孔中被带正电荷的胺基填充，适用于高效聚焦层析。多元缓冲液交换剂是一种交换凝胶，适用作普通聚焦层析的介质。各种凝胶性质见表16-8。
| 凝胶名称 | pH范围 | 洗脱 |
| MONOP | 11-8 | Pharmalyte 8-10.5 |
| PBE | 11-8 | Pharmalyte 8-10.5 |
| MONOP | 9-6 | 多元缓冲液96 |
| PBE 94 | 7-4 | 多元缓冲液74 |
| PBE94 | 7-4 | 多元缓冲液74 |
| 表16-8 聚焦层析技术数据 |
NONOP可制成两种高效液相柱：MONOP HR5/5(1ml)，和MONOP HR5/20(5ml)。使用时根据样品复杂性选择相应的柱。HR5/5分辨率为pI>0.2，HR5/20 pI>0.02。
多元缓冲液交换剂PBE，属珠状交换剂凝胶，有PBE 118（pH11-8）和PBE（pH9-4）。在聚焦层析时，通过使用不同的洗脱液，可使交换容量发生改变，并且使pH达到更广的范围。
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