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层析技术及离心技术

2020.9.07

(一)层析技术

层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。可分为吸附层析法、分配层析法、离子交换层析法、凝胶层析法、亲和层析法、高效液相层析法等。

在层析法中,根据层析峰的位置及峰高或峰面积,可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用,可检测出层析后各组分的浓度或质量,同时绘出层析图。

层析仪与电子计算机联用,可使操作及数据处理自动化,大大缩短分析时间。由于层析法具有分辨率高、灵敏度高、选择性好、速度快等特点,因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析,尤其适用于生物样品的分离分析。

纸层析是以滤纸作为支持介质,为液-液层析。由于固定相和流动相的极性不同,当流动相展开时,各组分按各自的分配系数不同而得到分离。

薄层层析是利用涂布在载体上的吸附剂等作为固定相,用适当的溶剂进行展开,其优点是:设备简单,操作容易,分离效率高,可用腐蚀性的显色剂并在高温下显色。

凝胶层析是以凝胶作为固定相,水或各类溶剂作为流动相,其机理是当被分离物质流经凝胶柱时,因各组分的分子大小不同在凝胶受到的阻滞作用有差异,从而造成各组分在凝胶中的迁移速度不同而得到分离。凝胶的网孔大小与交联度有关,交联度越大,网孔的孔径越小。被筛分的分子量越小。凝胶层析的主要操作步骤包括:凝胶柱的制备与平衡、加样、洗脱、标本检测等。

亲和层析是利用配体和生物大分子之间专一性亲和力的层析分离方法。具有专一性亲和力的生物分子主要有:抗原与抗体,酶与底物,激素与受体等。

离子交换层析是利用离子交换剂对各种离子亲和力的不同来分离混合物的层析技术。离子交换剂的种类有:离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换葡聚糖等。如按原理可分:阴离子交换剂、阳离子交换剂。

(二)离心技术

离心技术是根据颗粒在作匀速圆周运动时受到一个外向的离心力的行为而发展起来的一种分离技术。这项技术在临床生化中常用来分离化学反应后的沉淀物和收集生物大分子物质。

离心机依据离心机转头的旋转速度,可分为低速离心(4 000r/min以内)、高速离心(20 000r/min)和超速离心(30 000r/min以上)三种类型。离心机的主要结构包括转子、驱动轴和电机。其中转子可以有几种形式:固定角式转子、水平转子、区带转子、连续离心转子等等。

离心技术根据离心原理和工作的需要,大致可分为:①平衡离心法,包括差速离心法和速率区带离心法;②等密度离心法;③经典式沉降平衡离心法三类。

使用离心机时用注意转子的保养、离心管老化与否、装样量、操作规程、即期的定期保养。


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