家兔椎间盘细胞培养实验——贴块法
家兔椎间盘细胞培养可以：（1）获得家兔椎间盘细胞；（2）用于椎间盘相关课题研究；（3）用于家兔模型研究。
| 实验方法原理 | 首先建立家兔椎间盘细胞的体外培养系统，其中，第一组给予纯氧，另外3组给予不同浓度的臭氧：30 ug/ml，60 ug/ml和80 ug/ml，然后于15 min及30 min后，采用台盼蓝细胞排斥试验计算椎间盘细胞的活细胞率。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 一、实验步骤 1. 组织块贴块法
（1）取材：空气栓塞法处死家兔后，在无菌状态下获取家兔椎间盘组织。置于准备好的DMEM 培养基(含双抗)。迅速带回到无菌超净台上。
（3）接种：用吸管吸取小组织块入培养瓶底部，摆放均匀，一个25 cm2 的培养瓶可放置10-15 个小组织块，翻转培养瓶，加入少量培养液。4~6 小时后，待组织块充分贴壁后，再翻转回来(动作一定要轻巧， 以免刚刚贴壁的组织块脱离瓶底)。
（4）于5% CO2 孵箱中培养，每隔 3 天换液。待细胞 95%融合时，0.25%胰蛋白酶传代分瓶。
2. 酶消化法
（1）前面步骤同组织块贴块法 1、2。 二、结果 IVD 细胞为类软骨细胞，描述：单层细胞形状不规则，可呈三角形、多角形，梭形及不规则形。不同于成纤维细胞。如下图：
图1：组织块贴块法
图2：传代细胞形态
图3：细胞传代前状态95%融合 展开 |
| 注意事项 | 椎间盘位于相邻两个椎体之间，取材过程较为繁琐， 要求动作迅速，争取在家兔死后半小时内完成，否则，该组织对缺氧耐受性差导致培养失败。
|
-
焦点事件
