高效液相色谱-串联质谱法
动物源性食品等不同基质中糖皮质激素类药物的检测方法主要采用液相色谱法（HPLC）、液质联用法（LC-MS 或LC-MS/MS）和气质联用法（GC-MS）。
| 实验方法原理 | 糖皮质激素是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，具有调节糖、脂肪和蛋白质的生物合成和代谢的作用，还具有抗炎作用，称其为“糖皮质激素”是因为其调节糖类代谢的活性最早为人们所认识。糖皮质激素的基本结构特征包括肾上腺皮质激素所具有的C3的羰基、Δ4和17 β酮醇侧链以及糖皮质激素独有的17 α-OH和11 β-OH。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 一、样品制备 1.提取 在室温下，称取（2 ± 0.05）g组织样品于50 mL离心管内，加乙酸乙酯15 mL，涡旋混匀提取3 min，离心10 min（4000 rpm），移取乙酸乙酯层至50 ml梨形瓶中。残渣中加0.1 mol/L NaOH溶液10 mL，混匀，加乙酸乙酯15 mL提取后移取乙酸乙酯层。合并两次提取液，40 ℃下减压浓缩近干，加入乙酸乙酯1.0 mL和正己烷5 mL,使之充分溶解，待净化。 2.净化 用Silica固相萃取柱进行SPE净化。用正己烷5 mL活化固相萃取柱后，上样，先用正己烷 5 mL淋洗，抽干，然后用正己烷——丙酮（6∶4，v/v）5 mL洗脱。洗脱液在40 ℃下 N2吹干，以20％乙腈水溶液1.0 mL溶解残渣，过0.45 μm滤膜，供LC/MS/MS法测定液相色谱及质谱条件 二、色谱条件 1.色谱柱：Thermo Hypersil Gold （150 × 2.1 mm,5 μm）；梯度洗脱见表1，其中A：水（含0.01 %甲酸）；B：乙腈；流速：250 μL/min；进样量：10 μL。 2.质谱条件 电喷雾电离源（ESI），负离子模式；选择反应监控（SRM）扫描模式，喷雾电压：3500 V；离子传输管温度：350 ℃；氮气作为鞘气和辅助气，其中鞘气为40 arb, 辅助气为5 arb，氩气用作碰撞气， 碰撞压力为1.5 mTorr; 选择反应监测（SRM）。 展开 |
| 其他 | 本方法糖皮质激素类药物在猪、牛、羊的肝脏和肌肉，鸡肉，鸡蛋，牛奶中的提取回收率均可达60 - 110 %，满足国内外的最低检出限要求，并且定量定性准确，重现性好。 |
