高效液相色谱串联质谱法测定奶粉中的双氰胺
双氰胺又名二氰二氨，缩写DICY或DCD。是氰胺的二聚体，也是胍的氰基衍生物。白色结晶粉末，可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，几乎不溶于醚和苯。干燥时稳定。双氰胺化肥，双氰胺复合肥料可控制硝化菌的活动，使氮肥在土壤中的转化速度得到调节，减少氮的损失，提高肥料的使用效率。农民普遍会在牧场使用双氰胺，目的是防止硝酸盐等对人体有害的肥料副产品流入河流或湖泊。新西兰的奶牛养殖是采取放养的方式，如果草木干旱，奶农往往会使用一些肥料增强草木的抗旱性以及肥力，这就造成了污染。而由于新西兰国内注重环保，因此使用双氰胺对草木中的有害物质进行中和，这就导致了残留的药品流入奶牛体内，造成奶品的污染。
2013年1月25日，新西兰牛奶中发现了有害物质—双氰胺。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
奶粉中双氰胺的LCMSMS检测的难点在于：首先双氰胺本身的分子量很小，极性很大，一般的C18柱保留不住，其次婴幼儿奶粉的基质非常复杂，含有大量糖类和蛋白质，必须有合适的前处理方法以获得更好的净化效果。本实验选用Thermo Scientific Syncronis HILIC色谱柱配合Hypercarb净化柱，建立了双氰胺LCMSMS高效液相色谱串联质谱法测定奶粉中的双氰胺Application Notes CM0095周 亮赛默飞世尔科技(中国)有限公司的检测方法，结果显示该方法具有灵敏度高，重现性较好等特点。
2.实验部分
2.1仪器与试剂：TSQ Quantum Ultra三重四极杆串联质谱仪(赛默飞世尔科技Thermo Fisher Scientific公司)，配置有电喷雾电离源(ESI)；Dionex Ultimate 3000 RSLC超高压液相色谱标准品：双氰胺纯度大于98%，内标双氰胺-15N4纯度为95%。用乙腈溶解并配制成1.0 mg/mL标准储备液，再根据需要稀释成适当含量的混合标准工作液。其他试剂均为HPLC色谱纯。
2.2仪器方法：2.2.1液相条件：色谱柱：Syncronis HILIC，100mm× 2.1mm，5μm；梯度洗脱程序见表1，其中A为0.5mM NH4Ac(pH=4.0)水溶液，B为乙腈。进样量10μL.
2.2.2质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正离子模式；选择反应监控(SRM)扫描模式，喷雾电压：3000V；气化器温度350°C，离子传输管温度：350°C；氮气作为鞘气和辅助气，其中鞘气为30arb,辅助气为8arb，氩气用作碰撞气,碰撞压力为1.5mTorr;选择反应监测(SRM)，离子对见表2。
3结果分析
3.1灵敏度：经实验测定，双氰胺的LOD为0.25ng.mL-1，信噪比为20，提取离子流图见图1。
3.2线性范围
采用上述仪器方法进行测定，双氰胺在0.5ng.mL-1-100ng.mL-1呈现良好的线性相关性，线性相关系数为0.9998，浓度水平分别为：0.5ng.mL-1、1ng.mL-1、5ng.mL-1、10 ng.mL-1、50ng.mL-1、100ng.mL-1，内标双氰胺-15N4浓度为5ng.mL-1，线性方程见图2。
3.3精密度
对1ng.mL-1的双氰胺，采用上述仪器方法，连续进样7针，计算RSD值。结果为1.19%，离子流图如图3。
3.4 奶粉样品分析
取某市售婴幼儿奶粉试样，进行添加回收实验。奶粉的前处理方法如下：称奶粉基质样品2.000g，加10mL 1%的甲酸/水提取液，涡旋震荡提取5min，超声萃取10min；冷冻离心机6000R/min，离心10min，取上清液5mL到小离心管中，14000R/min离心10min，上清液全部过净化柱(3cc,200mg/Hypercarb)，控制流速1mL/min，用10mL超纯水清洗柱子；用甲醇/乙腈(4/6)洗脱，接取洗脱液氮气吹干(40°C)，用1mL(乙腈/水，9:1)定容，0.22微米有机滤膜过滤，上机检测。结果表明，空白基质在双氰胺及内标双氰胺-15N4的出峰位置没有干扰，添加5ng.mL-1的色谱图如图4，该图中上方为基质添加，下方为基质空白。
结论：TSQ Quantum Ultra三重四极杆液质联用系统检测奶粉中双氰胺具有灵敏度高、特异性好的优点，检测定量限可以做到0.25ng.mL-1。并且该方法具有良好的线性范围与精密度，在0.5ng.mL-1-100ng.mL-1的线性相关系数为0.9998，重复进样7针1ng.mL-1的双氰胺的RSD值为1.19%。使用Hypercarb净化柱能很好的处理奶粉样品，空白基质没有干扰，证明该方法检测双氰胺具有很好的适用性
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