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磷钨酸还原法检测血清尿酸(UA)实验

2020.8.10
实验方法原理去蛋白血滤液中的尿酸在碱性溶液中被钨酸氧化成尿囊素及二氧化碳,磷钨酸在此反应中则被还原成钨兰,钨兰的生成量与反应液中尿酸含量成正比,可进行比色测定。
实验步骤

一、实验试剂:

1. 磷钨酸贮存液:称取钨酸钠50g,溶于约400ml蒸馏水,加浓磷酸40ml及玻璃数粒,煮沸回流水冷却至室温,用蒸馏水稀释至1升,贮存在棕色试剂瓶中。

2. 磷钨酸应用液:取10ml磷钨酸贮存液,以蒸馏水稀释至100ml。

3. 0.3 mol/L钨酸钠溶液:称取钨酸钠(Na2WO42H2O,MW329.36)100g,用蒸馏水溶解后稀释至1升。

4. 0.33mol/L硫酸:取18.5ml浓硫酸,加入500ml蒸馏水中,然后用蒸馏水稀释至1升。

5. 钨酸试剂:在800ml蒸馏水中,加入50ml,0.3mol/L钨酸钠溶液,0.05ml浓磷酸和 50ml,0.33mol/L硫酸,混匀,在室温中可稳定数月。

6. lmol/L碳酸钠溶液:称取10.6g无水磷酸钠溶液在蒸馏水中,并稀释至1升,置塑料烧瓶内,如有混浊,可过滤后使用。

7. 6.0 mol/L尿酸标准贮存液:取60mg碳酸锂(AR)溶解在40ml蒸馏水中加热到60℃,使其完全溶解,准确称取尿酸(MW168.11)100.9mg,溶解于碳酸锂溶液中,冷却置室温,移入1000ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,贮存在棕色瓶中。

二、实验操作:于3支16mm×l00mm试管(测定,标准和空白)中各加4.5ml钨酸试剂,分别加人0.5ml血清,0.5ml标准应用液和0.5ml蒸馏水,混匀后静止数分钟,测定管离心沉淀,然后按下表操作:

混匀,室温放置20分钟后,用分光光度在彼长660nm,比色杯光径1.0cm,以空白管调零,读取各管吸光度。

三、计算:

血清尿酸μmol/L=测定管吸光度/标准管吸光度×300

参考值:男性149-461 μmol/L(2.57-7mg/dL)

女性89-357umol/L(1.5-6mg/dL)

注意事项1. 红细胞内存在多种非特异性还原物质,因此用血清或血浆测定比用全血好。2. 用草酸钾与钨酸钠容易形成不溶性磷钨酸钾,造成显色液混浊,不能用草酸钾抗凝剂。3. 血清与尿液标本中的尿酸在室温可稳定3天,尿液标本冷藏后,可引起尿酸盐沉淀,此时可调节PH至7.5-8.0,并将标本加热至50℃,待沉淀溶解后再进行测定。4. 尿酸在水中溶解度极低,但易溶于碳酸盐溶液中,配制标准液时,加入碳酸锂并加热助溶,如无碳酸锂,可用碳酸钾或碳酸钠代替。


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