DNA测序仪pcr测序反应
pcr测序反应
(1) 取0.2ml的pcr管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂：
所加试剂 测定模板管 标准对照管
bigdye mix 1μl 1μl
待测的质粒dna 1μl －
pgem-3zf (+) 双链dna － 1μl
待测dna的正向引物 1μl －
m13(-21)引物 － 1μl
灭菌去离子水 2μl 2μl
总反应体积5μl，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧pcr管，用手指弹管混匀，稍离心。
(2) 将pcr管置于9600或2400型pcr仪上进行扩增。98℃变性2min后进行pcr循环，pcr循环参数为96℃ 10s，50℃ 5s，60℃4min，25个循环，扩增结束后设置4℃保温。
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