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病毒的培养方法实验——鸡胚培养法

2019.4.09

病毒必须在易感的活细胞内才能增殖,因此,根据不同病毒选择敏感动物,离体组织细胞和鸡胚进行分离培养。

实验方法原理鸡胚培养方法操作简便,适用于流感病毒,痘病毒,疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种,即绒毛尿囊膜接种法,羊膜腔(羊水囊)接种法,尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不同目的采用适宜的接种方法。
实验步骤

1.  鸡胚的检查

将9~11 日龄鸡胚置于检卵器上,照视观察鸡胚是否生活,根据①小血管是否清晰;②胚胎是否活动,观察小鸡的眼睛黑点是否移动。如果鸡胚不动,血管昏暗模糊,变黑或苍白都表示已死亡。

2.  接种

用铅笔标明天然气室及鸡胚位置,然后在绒毛尿囊膜发育区〈照视时呈现红色〉近胚位处的气室边缘作一记号,定为注射入口。

用碘酒消毒注射入口和天然气室端的蛋壳,再用电钻,口腔科用牙钻和小锉刀,于注射入口和天然气室端的蛋壳上锯一小孔,勿伤及卵膜。

用大头针通过火焰消毒后刺穿气室端所开小孔的卵膜,这样可避免在注射时液体回流出来。

将鸡胚横卧于蛋架上,用无菌l 毫升注射器抽取病毒液体,针头与卵壳成30(交角,由注射器小孔剌入0.5~1.0 厘米,注0.1~0.2 毫升。

注射完毕,用胶布封口,封口前胶布用碘酒消毒,并通过火焰烧去余碘,用过的注射器用煮沸法消毒,鸡胚放入35~37 ℃培养。

注射后次日,逐日观察鸡胚生活情况,孵育48~72小时后移入4℃冰箱过夜。注意鸡胚必须直立,令气室端朝上。

收获尿囊液之前取出鸡胚,用碘酒消毒气室端,并将镊子击破气室端卵壳,沿气室边缘小心打开一大缺口,然后用小镊子撕去卵膜及撕破绒毛尿囊膜,最后用毛细管吸取尿囊液,一般可吸得4~5 毫升。

滴定尿囊液的病毒血凝效价。

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注意事项

尿囊接种法适用于某些呼吸道病毒如流感,副流感,新城鸡瘟等病毒之培养,唯分离培养不如羊膜腔接种法的阳性率高。


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