病毒的鸡胚培养_尿囊腔接种
| 实验方法原理 | 尿囊腔接种法广泛应用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适应和传代培养，这些病毒被注射到尿囊腔后，可在内皮细胞中复制，复制的病毒被释放到尿囊液中，因此，在尿囊液中含有大量的病毒。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 |
1. 接种步骤与方法 (1) 取 9~11 日龄的鸡胚，在检卵灯上照视后，用铅笔划出气室与胚胎位置，并在胚胎面与气室交界之边缘上约 1 mm 处避开血管作一标记，此即为注射点。 (2) 将鸡胚竖放在卵杯上，钝端向上。用 2.5%碘酒及 75%酒精分别消毒气室部的蛋壳，并用开孔器钻开一长约 2 mm 小口，此操作勿损伤壳膜。 (3) 再次用 2. 5%碘酒消毒钻孔区，以擦去蛋壳碎粒，并用1 ml 注射器吸取待接种的病毒液 0. 1~0. 2 ml, 将针头刺入孔内，经尿囊膜入尿囊腔，注入病毒液。 (4) 用 2. 5%碘酒消毒后，再用石蜡溶化封孔，于 33-35℃孵卵器孵育 48~72 h(培育时间应根据病毒种类及收获的材料何时使用而定），每日照检，于接种后 24 h 内死亡者为非特异性死胚应弃去。 2. 解剖与收获 接种后收获病毒的时间根据不同病毒而异，甲型流感病毒一般培养 44~48 h,乙型流感病毒培养 72 h 。 (1) 收获前鸡胚须置 4℃冰箱 6 h 或过夜，但不能放置时间过长。 (2) 用 2. 5%碘酒和 75%酒精消毒气室处的卵壳，并用灭菌剪刀剪去气室部的卵壳，此时勿使其碎片落于未损伤的壳膜上。用无菌镊子撕去气室部壳膜，并翻开到卵壳边上。 (3) 将鸡卵倾向胚胎一侧，用灭菌毛细吸管通过绒毛尿囊膜进入尿囊腔，吸出尿囊液。一般一个鸡胚可收获 5~10 ml 的尿囊液。若操作时损伤了血管，则病毒会吸附在红细胞上，尿囊液则无用。收获的尿囊液经无菌试验后，可在 4℃或低温保存待用。 展开 |
推荐
