人单个核细胞的分离
实验概要
人单个核细胞的分离
主要试剂
DPBS、0.5%甲基纤维素、人淋巴细胞分离液、人HSCs培养液
主要设备
离心机，超净台，体视镜，倒置显微镜，96孔培养板，T75培养瓶，25mL/10mL/5mL移液管
实验材料
脐带血100 mL，取自医院，并和产妇签知情同意书
实验步骤
（1）用血袋从医院取脐带血100 mL左右，移至T75培养瓶中，并按1:1的比例加入DPBS稀释脐带血，混匀后再按4:1的比例加0.5%甲基纤维素，轻轻混匀后室温静置30～45 min。
（2）待红细胞自然沉降至界限分明时，用移液管吸出上清到50ml的移液管。
（3）室温1500 r/min或者300 g离心5 min。
（4）弃上清，加5 mL的DPBS重悬细胞。
（5）预先在15 mL离心管中加入5 mL淋巴细胞分离液，静置3～5 min后再沿管壁缓慢加入第（4）步的5 mL细胞悬液，室温1500 r/min或者300 g离心20 min。
（6）离心结束后取出离心管，观察分层情况，收集单个核细胞界面（中间白膜层）的液体，用5～10 mL DPBS洗涤，然后取少量细胞用0.5%台盼兰染色计数活细胞。一般情况下100 mL的血能收集到1x108个单个核细胞。
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