含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝胶的制备实验

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含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝胶的制备实验

2019.3.25

在 DNA 测序中一个常见的问题是由于 DNA 二极结构的存在而造成电泳条带的压缩。一个简单直接的解决办法是在测序胶中加入甲酰胺以减少二极结构的形成。在 G/C 含量高于 55% 时，几乎是必须使用含有甲酰胺的凝胶。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

试剂、试剂盒	本方法包括方案 8 中所有物品加上：甲酰胺（100%)
实验步骤	材料本方法包括方案 8 中所有物品，加上：甲酰胺（100%) 方法 1. 依方案 8 步骤 1~8 淸洗并安装玻璃板制成胶模。 2. 在实验桌的工作区上铺上衬塑料的保护纸。灌制测序凝胶时几乎不可避免将丙烯酰胺溶液滴于桌面，可准备一个大托盘对其进行收集。 3. 在一个 250 ml 有臂锥形瓶中配制适当浓度的丙烯酰胺溶液（表 12-20)。这些溶液足够配制一块 40 cmx40 cm 的测序凝胶。重要：凝胶的配制必须一气呵成，中碱间不能断断续续。 4. 混合所有试剂，在 55°C 水浴中加热 3 min 帮助尿素溶解。溶解尿素的过程十分缓慢，必须依靠外部加热。 5. 从水浴中取出溶液，冷却 15 min 至室温。不断搅拌混合物。加水到 100 ml。 6. 把烧瓶放在真空装置里抽去气体。防止聚合时产生气泡，该过程会产生热量。 7. 把溶液放入 150 ml 玻璃烧杯中。加 3.3 ml 新制的 1.6% 的过硫酸铵，轻轻搅动溶液使试剂混匀。 8. 加 50ul TEMED，旋动容器以混匀溶液。直接配胶或者用 60 ml 注射器吸取 40 ml 上述溶液。注意，不要有气泡。 9. 依方案 8 中步骤 16~22。重要：由于甲酰胺减慢了聚合速度, 聚合常需要 2~3 小时。

试剂、试剂盒

本方法包括方案 8 中所有物品加上：甲酰胺（100%)

实验步骤

材料

本方法包括方案 8 中所有物品，加上：
甲酰胺（100%)

方法

1. 依方案 8 步骤 1~8 淸洗并安装玻璃板制成胶模。

2. 在实验桌的工作区上铺上衬塑料的保护纸。
灌制测序凝胶时几乎不可避免将丙烯酰胺溶液滴于桌面，可准备一个大托盘对其进行收集。

3. 在一个 250 ml 有臂锥形瓶中配制适当浓度的丙烯酰胺溶液（表 12-20)。这些溶液足够配制一块 40 cmx40 cm 的测序凝胶。
重要：凝胶的配制必须一气呵成，中碱间不能断断续续。

4. 混合所有试剂，在 55°C 水浴中加热 3 min 帮助尿素溶解。
溶解尿素的过程十分缓慢，必须依靠外部加热。

5. 从水浴中取出溶液，冷却 15 min 至室温。不断搅拌混合物。加水到 100 ml。

6. 把烧瓶放在真空装置里抽去气体。
防止聚合时产生气泡，该过程会产生热量。

7. 把溶液放入 150 ml 玻璃烧杯中。加 3.3 ml 新制的 1.6% 的过硫酸铵，轻轻搅动溶液使试剂混匀。

8. 加 50ul TEMED，旋动容器以混匀溶液。直接配胶或者用 60 ml 注射器吸取 40 ml 上述溶液。注意，不要有气泡。

9. 依方案 8 中步骤 16~22。
重要：由于甲酰胺减慢了聚合速度, 聚合常需要 2~3 小时。

制备实验

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