核糖核酸的测定
【实验原理】
RNA分子中的核糖在浓酸中加热，脱水转变成糖醛，后者在氯化铁存在下，与地衣酚试剂（3，5-二羟基甲苯）反应，缩合成绿色化合物，在670nm处有最大吸收峰，从而可进行定量测定。待测样品中的RNA浓度在20～200µg/mL之间时，其吸光度与浓度成正比。反应式如下：
核 糖 糖 醛 绿色化合物
【实验内容与方法】
1．取中试管3支，按表2-17操作
表2-17 RNA的测定方法
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试 剂（mL） |
标准管 |
标本管 |
空白管 |
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RNA标准液 |
1.0 |
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RNA提取液 |
1.0 |
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蒸馏水 |
1.0 |
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地衣酚试剂 |
3.0 |
3.0 |
3.0 |
2． 混匀各管 置于沸水浴中加热10min，取出冷却，以空白管调零点，在670nm波长处比色，读取各管的吸光度。
3．计算
【实验准备】
1． RNA标准液 准确称取RNA用0.001mol/L NaOH配制成100mg/mL的溶液。
2．地衣酚试剂 称取地衣酚（3，5-二羟基甲苯）100mg，溶于100mL浓盐酸（AR）中，再加入100mg FeCl3.6H2O。应用前新鲜配制。
3．仪器：紫外可见分光光度计、试管、刻度吸管
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