蛋白质免疫印迹制备分离胶、积层胶
1）所需器材：制冰机、制胶槽、Teflon梳子、小烧杯、手套、大冰盒、去离子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸钠）、10%AP（过硫酸铵）、TEMED（四甲基乙二胺）、移液枪、吸头。
2）操作步骤
a.制冰机制冰；
b.将制胶槽双层玻片装进制胶槽小夹子（双层玻片左右方及下方要注意对齐），滤纸吸干双层玻片中残留液体，再将小夹子装进制胶槽大夹子，平放（制胶槽所放平面一定要水平）；
c.将大冰盒装上冰，戴好手套，取出保存于4℃冰箱的30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-Hcl(PH值8.8)、1.0mol/L的Tris-cl(PH值6.8)、TEMED、保存于-20℃冰箱的10%AP，备好存放于常温的去离子水、10%SDS，根据所需配制的分离胶浓度及量，依次往小烧杯中加不同体积的去离子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-Hcl、10%SDS、10%AP、TEMED。加入TEMED后，立即用移液枪吸头混匀小烧杯胶液，倒入制胶槽双层玻璃中（留梳齿+1cm长以备加积层胶），轻轻抖动几下制胶槽使液面平齐，再用去离子水（当BXXA浓度〈8%时也可采用0.1%的SDS，当BXXA浓度〉10%时也可采用异丁醇）封闭液面以免氧气扩散进入凝胶抑制聚合反应，静置半小时；
c.待分离胶凝固后（分离胶与去离子水界面可看到一条分离线），根据所需制备积层胶的浓度和量，往小烧杯中依次加入不同体积的去离子水、30%聚BXXA溶液、1.0mol/L的Tris-cl(PH值6.8)、10%SDS、10%AP，然后先将分离胶上层的去离子水倒去，再用去离子水冲洗去除未聚合的凝胶，滤纸吸净残留液体。往小烧杯加入TEMED，立即用移液枪吸头混匀小烧杯胶液，倒入制胶槽双层玻璃中分离胶上方，小心插入梳子，注意不能留有汽泡（操作时先使梳孔下缘接触液面，再左右两边平衡缓慢插入梳子），静置半小时待积层胶凝固（凝固后梳齿边缘可看到分离线）。
