一种简单实用的提取植物DNA实验
实验方法原理 的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术，至今已有了数种方法。此方法最大的特点是：将SDS同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂，变性的蛋白质通过离心而不是酚抽提除去，使得整个操作过程变得简单快捷，比较温和，1小时左右就可以获得纯化的植物DNA。用这种方法得到的DNA能直接被限制性内切酶酶解，纯度较高，适用于分子生物学的研究。本实验的目的是掌握DNA提取的原理和方法。
实验步骤
一、材料与方法：
1、植物材料：螺旋藻（Spirulina platensis）、水稻（Oryza sativa）和烟草（Nicotianatabacum）.
2、试剂和溶液：
（1）20×SSC：3mol·L-1柠檬酸钠，pH8.0：
（2）溶菌酶、10μg·μl-1Rnase、10%SDS（均为Sigma产品）；
（3）酚：氯仿：异戊醇=25：24：1
（4）TE：10mmol·L-1Tris-HCL、1mmol·L-1EDTA，pH7.6。
3、提取步骤：
收集对数生长期的螺旋藻细胞，悬浮于5倍体积（v/w）含2mg·mL-1溶菌酶的20×SSC中，室温保持10分钟，偶尔摇动混匀。水稻幼苗和烟草嫩叶在液氮中研磨成粉状后，立即用5倍体积的20×SSC悬浮，并轻轻拌匀。上述悬浮液在冰上先放置3分钟，然后加入10% SDS至终浓度为2%，混匀；继续放置10分钟后，在4℃用11000×g离心15分钟。上清液转移至新的离心管中，并用相同体积的TE稀释，再加入RNase至终浓度为10μg·ml-1，室温放置30分钟。11000×g离心15分钟，所得的DNA沉淀用70%的乙醇洗两次后，真空中抽干或自然干燥，最后溶于适量的TE中。
二、结果与讨论：
利用本方法，从烟草、水稻和螺旋藻中提取了DNA。因为整个过程的操作步骤较少，也较温和，减少了DNA被弄断的机会，所以所得的DNA分子量较大，大部分都比完整的λ噬菌体的DNA（48.5Kb）还大。另外，用此方法所提的DNA的OD260/OD280的比值1.8至1.9之间，并能被限制性内切酶酶切，显示有较好的纯度。
在使用本方法时，须注意下面的几个问题。当20×SSC的悬浮液中加入SDS至2%后，溶液中会出现白色絮状物质，表明蛋白质已经变性，这是本方法的主要特点之一。它通过变性后离心而不是常用的多次酚抽方法，将绝大部分的蛋白质除去。离心所得的上清液，需要用TE稀释，这是因为溶液中的盐浓度较高，如不稀释，RNase就无法起作用；而且在沉淀DNA时，如用乙醇会将溶液中的盐析出，如用异戊醇则形成两相的界面，将溶液中盐的浓度降低后，就解决了这些问题。但是，加大稀释TE的体积，对于DNA的产量并无非常明显的作用，用等体积的TE稀释即可。DNA抽提液经RNase酶解后，再用酚：氯仿：异戊醇抽提一次，用以除去剩余的蛋白质和酶。本方法适用于大量和微量的DNA制备。大量制备时，RNase酶解和酚：氯仿：异戊醇的抽提步骤可以在DNA浓缩一些后再使用，这样就较便于操作，并且节省RNase和酚。通常，用这种方法能从每克新鲜组织中提取到10至15μg的DNA。
