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荧光光谱仪先进分析方法的介绍

2021.12.17

  1、同步荧光分析。它与常用荧光测定最大的区别是同时扫描激发和发射两个单色器波长,由测得的荧光强度信号与对应的激发波长(或发射波长)构成光谱图,即同步荧光光谱。步荧光分析具有光谱简单,谱带窄、分辨率高、光谱重叠少等优点,可提高选择性,减少散射光等的影响,非常适合多组分混合物的分析,在环境、药物、临床、化工等领域应用广泛。

  2、偏振荧光分析。荧光体的荧光偏振与荧光各向异性值的测定,能够提供与荧光体在激发态寿命期间动力学相关的信息,因此荧光偏振技术被广泛应用于研究分子间的作用,例如蛋白质与核酸、抗原与抗体、蛋白质与多肽的结合作用等。

  3、三维荧光分析。普通荧光分析所得的光谱是二维谱图,而描述荧光强度同时随激发和发射波长变化的关系谱图,就是三维荧光光谱。它可以提供比常规荧光光谱和同步荧光光谱更为完整的光谱信息,是很有价值的光谱指纹技术。三维荧光光谱可以作为光谱指纹技术在环境监测(溶解有机质的分布等)、临床化学(根据癌细胞荧光代谢产物的检测,区分癌与非癌细胞等)以及细菌鉴别等领域应用;也可用于光化学反应监测、多组分混合物的定性和定量分析等。

  4、时间分辨荧光分析。由于不同分子的荧光寿命不同,可在激发与检测之间延缓一段时间,使具有不同荧光寿命的物质得以分别检测,即时间分辨荧光分析。采用激光光源可以获得皮秒(ps)级的脉冲宽度,可用于测定大多数荧光物质的寿命,非常有助于生物大分子和基团作用的研究。该技术与荧光免疫分析结合形成了时间分辨荧光免疫分析法。

  5、低温荧光分析。通常荧光分析都在室温下进行,荧光光谱为带光谱,由于自然界有许多有机化合物,其化学结构颇为接近,它们的光谱往往相互重叠,难以鉴别表征以及定量测定。随着温度的降低,介质黏度增大,荧光分子量子产率和荧光强度将增大。因此,在低温以及特殊条件下,荧光物质就能给出更易识别的的尖锐荧光光谱(“准线性光谱”)。这就有可能对样品中所含荧光体进行“指纹识别”,甚至有可能对混合物中某些特定组分进行定量测定。低温荧光分析可用于多环芳烃及衍生物的鉴别与定量、DNA加合物的分析等。

  单分子荧光检测。单分子荧光分析是实现单分子检测最灵敏的光分析技术。单分子荧光检测的关键在于确保被照射的体积中只有一个分子与激光发生作用以及消除杂质荧光的背景干扰。单分子荧光检测可提供单分子水平上生物分子反应的动力学信息,分子构象以及构象随时间的变化,因此尤其在生命科学领域中具有广阔的应用前景,为生命科学提供了新的研究手段。

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