免疫复合物的检测
免疫复合物在体内存在有两种方式，一是存在于血液中的循环免疫复合物（CIC），一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。
一、循环免疫复合物的检测
根据免疫复合物的物理学、免疫学和生物学特性，已经设计出很多检测CIC的方法（表1）。
表1 循环免疫复合物的常用检测方法
| 类别 | 原理 | 方法 | 敏感性 | 备注 |
| 物理法 | 分子大小 | 1、超速离心 | —— | 适于研究 |
| 2、分子超滤 | —— | 适于研究 | ||
| 3、凝胶过滤 | 30μg | 适于研究 | ||
| 溶解度 | 1、PEG沉淀 | 20μg | 粗定量，易推广 | |
| 2、冷沉淀 | —— | 定性，临床应用 | ||
| 补体法 | 固定补体，结合C1q | 抗补体试验 | 0.1μg | 常用，特异性差 |
| 1、C1q凝胶沉淀试验 | 100μg | 定性，不易普及 | ||
| 2、C1q偏离试验 | 4μg | 不易普及 | ||
| 3、液相法 | 10μg | 不易普及 | ||
| 4、固相法 | 1μg | 不易普及 | ||
| 胶固素 | 胶固素结合试验 | 3μg | 敏感，稳定 | |
| 抗Ig法 | 结合RF | 1、RF凝胶沉淀试验 | 100G | 定性，不敏感 |
| 2、mRF固相抑制试验 | 1～20μg | 不易普及 | ||
| 3、PRF凝集抑制试验 | 1～10μg | 不易普及 | ||
| 结合Ig | 抗抗体法 | 2～3μg | 不易普及 | |
| 细胞法 | Fc受体 | 1、血小板凝集试验 | 1～4μg | 需新鲜制备 |
| 2、ADCC抑制试验 | 5～10μg | 细胞活性质控难 | ||
| 3、Mφ吞噬抑制试验 | 0.03μg | 细胞活性质控难 | ||
| 补体受体 | 1、Raji细胞法 | 6μg | 需维持细胞株 | |
| 2、花环抑制试验 | 10μg | 影响因素多 |
（一）物理测定法
1、聚乙二醇法 聚乙二醇（PEG）是乙二醇聚合而成的无电荷形多糖分子，分子量变化范围较大，常用的分子量是6000。用3％～4％浓度的PEG可以选择性地将大分子免疫复合物沉淀下来，其作用机制尚不甚清楚。将PEG溶液与待检血清混合，置4℃冰箱过夜后离心，将沉淀物用PEG溶液充分洗涤，重新溶解于0.01mol/L的NaOH中，在波长280nm下测量溶液的吸光度；也可利用散射比浊 法直接测定PEG沉淀的免疫复合物；以不同浓度的热聚合IgG作为参考标准来计算CIC的含量。聚乙二醇法简单易行，可在临床工作中推广。但此法易受多种大分子蛋白和温度的干扰，特异性稍差。PEG法还特别适用于沉淀获得CIC，再进行解离分析其中的抗原与抗体。
2、冷球蛋白测定 在某些病理情况下，血清中的免疫复合物具有可逆性冷沉淀的特性，于4℃冰箱中放置1～3天可自发地沉淀下来；此种情况多见于冷球蛋白血症，所涉及的抗原包括自身的IgG、IgM、核苷酸、肿瘤相关抗原、肾小管上皮、甲状腺球蛋白、红细胞基质等，还有外源性抗原如乙肝病毒、EB病毒、巨细胞病毒、牛白蛋白和马蛋白等。
（二）补体相关测定法
IgG和IgM类抗体与抗原结合后，重链CH2区的补体结合点暴露，可以固定C1q并激活补体的系列反应，这是利用补体有关技术检测免疫复合物的基础。
1、C1q结合试验 将待检血清先行加热56℃30min，以灭活其中的补体和破坏已与CIC结合的C1q，空出补体结合点。CIC与C1q的结合可用多种方法进行检测，常用的有以下3种。
（1）液相法 先将同位素标记的C1q与灭活过的血清标本混合作用，再加入0.5%（终浓度）的PEG将结合了C1q的CIC沉淀下来，通过检测沉淀物中的放射活性来计算CIC的含量。
（2）固相法 先将C1q吸附于固相载体表面，加入待检血清使CIC与C1q结合，再加入同位标记的或酶标记的抗人IgG或SPA，最后检测其放射活性或酶活性。
（3）C1q偏离试验 先将同位素标记的C1q与灭活的血清标本混合，再加抗体致敏的绵羊红细胞，温育后离心，检测红细胞上的放射活性。红细胞的放射活性与免疫复合物的量呈负相关。
2、补体试验 本法的原理类似补体结合试验。将一定量的补体（多为混合豚鼠血清）与灭活的待检血清混合温育，反应后加入致敏绵羊红细胞。如出现溶血表示血清中没有CIC存在；不溶血说明标本中有CIC存在。将血清标本做不同稀释，并与已知的热聚合IgG作对照，可以计算出CIC的含量。本方法的灵敏度较高，且易于在一般实验室开展，不足之处是特异性较差。
3、胶固素结合试验 胶固素（conglutinin）是牛血清中的一种正常蛋白，能与C3d特异性结合；体内与补体结合的CIC都带有C3d，因此胶固素可与CIC结合。用一定量的胶固素包被塑料管，往管中加入稀释的血清标本，温育后再加入同位素标记或酶标记的抗人IgG抗体，最后检测各管的放射活性或酶活性，计算CIC的含量。胶固素性质稳定、容易保存、来源方便、价格便宜，检测方法也不复杂，便于推广。本法的不足是只能检出已结合补体的CIC，但不论何种激活途径都一样检出，并可用作CIC分离。
（三）抗球蛋白测定法
类风湿因子（RF）为抗IgG的自身抗体，与变性IgG、热聚合IgG和IC都有较强的亲和力。单克隆RF（mRF）可从待发性冷球蛋白血症的血清中提取，多克隆RF（pRF）可从类风湿性关节炎的血清中提取。用mRF比pRF的敏感性更高一些。
1、mRF固相抑制试验 将mRF吸附于固相载体上，随后加入血清标本，再加入同位素标记的可溶性热聚合IgG。如果标本中含有IC，固相mRF已与IC结合，热聚合IgG与mRF的结合使被抑制，所以固相中的放射活性与CIC的含量呈负相关。也可用同位素标记的mRF先与血清标本反应，再加入热聚合IgG附着的琼脂糖珠，温育并离心洗涤后测量沉淀物的放射强度，测定值与CIC的含量呈负相关。此法的敏感性比前法更高一些。
2、pRF胶乳凝集抑制试验 将pRF与血清标本混合，再加入IgG致敏的胶乳悬液。如果标本中有CIC存在，则pRF先与之结合，凝集反应呈阴性。
3、抗抗体法 抗抗体可存在于极个别的健康人血清中，是一种抗IgG F（ab＇）2的IgM类抗体，能与已结合抗原的IgG反应，但不与游离的IgG或热聚合IgG反应，因而特异性较高。先将抗抗体与待检血清混合，再加入IgG致敏的人O型Rh+红细胞；如标本中有CIC存在，抗抗体被中和，致敏红细胞不出现凝集。
以上各种抗球蛋白试验以mRF法敏感性最高，但是mRF较难寻找。这类方法易受内源性RF的干扰，最好先行检查并除去标本中的内源性RF后再行试验。若遇标本中有聚合Ig，RF法也易出现假阴性；改用抗抗体法可避免这种现象，但是抗抗体的来源困难。
