PeproTech细胞因子和重组蛋白溶解必读（二）
有用户会问，若想保证溶解液与冻干粉充分混匀，以实现细胞因子或重组蛋白的完全溶解，该怎么办呢？
答：多数细胞因子或重组蛋白的冻干粉是非常容易溶解的，一般我们用移液枪的枪头轻吹几下，即可使细胞因子或重组蛋白完全溶解。
对于不易溶解的细胞因子或蛋白，PeproTech会在说明书中进行备注(Note)。如在重组人IL-13(产品编号：200-13)的说明书中您会看到：Slow to dissolve (缓慢溶解)，在重组人IL-11(产品编号：200-11)的说明中会看到： This solution is slow to dissolve.(该溶液溶解缓慢)。这种情况下，您最好能将要溶解的细胞因子或重组蛋白放在水平摇床(shaker)上低速摇一段时间，促使细胞因子或重组蛋白完全溶解。
有些蛋白，如重组人IL-13 Variant (产品编号：200-13A)虽然难溶，但却不需用摇床来加速溶解。其说明书上的备注为：Allow the reconstituted vial to sit at 4o C for at > 2 hours before use. (将重悬液在4oC静置2小时以上)
3. This solution can be stored at 2-8℃ for up to 1 week.
第 3 步：该重悬液在 2-8℃ 最长可保存 1 周。
用说明书上推荐的溶液将细胞因子或重组蛋白重悬到推荐的浓度后，细胞因子或重组蛋白可放置在2-8℃，即冰箱的冷藏室。在这种条件下，细胞因子或重组蛋白的活性最长可保持1周。这对一个周期为5-7天的实验，如DC(树突状细胞)的诱导成熟是足够的。在此期间，只要每次从冰箱里吸取一定量的细胞因子或重组蛋白溶液加入到培养体系内即可。
其实，说明书上推荐的浓度对于一般的实验来讲是比较高的。所以用户通常会将该溶液进一步稀释后再放在4℃保存，待1周内用完。如进行稀释，必须遵照下面第4步的方法，即需用含载体蛋白的溶液进行稀释，否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降，细胞因子或重组蛋白的总活性则大为减弱。
4. For extended storage, it is recommended to further dilute in a buffer containing a carrier protein (example 0.1% BSA) and store in working aliquots at -20℃ to -80℃.
第 4 步：如要长期保存，则需用含载体蛋白 ( 如 0.1% BSA ，或 10% FBS ，或 5% HSA) 的溶液进一步稀释，然后分装冻存于 -20℃至 -80℃ 。
如果一个实验周期长于一周，或配制的细胞因子或重组蛋白一次用不完，我们就需对细胞因子或重组蛋白进行长期保存。方法是：将已重悬的细胞因子或蛋白用含载体蛋白，如0.1% BSA(牛血清白蛋白)，10% FBS(胎牛血清)，5% HSA(人血清白蛋白)的溶液将重悬液进一步稀释，然后分装冻存于-20℃至-80℃，即常规冰箱的冷冻室或超低温冰箱中。
经常有人会在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐的溶液重悬后直接分装冻存于-20℃至-80℃，这样可以吗？
答：不行。我们知道，塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用，也就是说溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。粘附后，蛋白是很难与管壁分离的。做过ELISA实验的人都知道，ELISA的包被抗体(Capture antibody)就是通过这种粘附作用包被到酶标板上的。
载体蛋白，如1% BSA，10% FBS (胎牛血清)和5% HSA等的主要作用是预先封闭塑料管壁上的蛋白结合位点，使细胞因子或重组蛋白不会粘附于管壁。如果在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐的溶液重悬后不用含载体蛋白的溶液进一步稀释，而直接分装冻存，则溶液中的大部分细胞因子或重组蛋白均会粘附到管壁上，导致溶液中实际溶解的细胞因子或重组蛋白的浓度大为降低，最终表现为细胞因子或重组蛋白活性的下降。
因此，在分装冻存前，一定要用含载体蛋白的溶液将重悬液进一步稀释。 稀释后的细胞因子或重组蛋白可为任意浓度，因大量的载体蛋白可以保证低浓度细胞因子或重组蛋白仍然维持较高的稳定性。
那么，含载体蛋白的溶液指的是什么溶液呢？水可以吗？
答：水不可。该溶液通常是指pH近中性，有一定缓冲能力的缓冲液，如PBS，培养液(RPMI1640, DMEM等)等。
还有一个经常被问及的问题，即在做无血清培养或动物的体内实验时，细胞因子中不能含有BSA，FBS或HSA等动物或人的蛋白，要想长期保存细胞因子或重组蛋白该怎么办呢？
答：一种方法是订购PeproTech的小包装(size A)细胞因子或重组蛋白，每次使用一只，用后即废弃。如觉得该方法过于浪费，则可用海藻糖(Trehalose)作为载体，用含海藻糖的溶液来稀释已重悬的细胞因子或重组蛋白，然后分装冻存。
总之，为保证细胞因子或重组蛋白冻干份在重悬后仍能保持良好的生物活性，必须按照说明书中 Reconstitution 的方法严格操作。
蛋白有价，实验无价，愿大家珍惜每次实验机会，严谨认真，每次均能得到预期的实验结果！
