对虾虹彩病毒核酸检测试剂盒使用说明
对虾虹彩病毒（IRDO）核酸检测试剂盒（一管式恒温荧光法）
◆ 产品说明
动物疫病检测系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对水样、饵料、活禽、水生动物及相关加工品等样品中病毒的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于对虾虹彩病毒（IRDO）的检测，检出限为103copies/μl基因组DNA。
◆ 产品组成（ 48测试）
031161MⅢ | |
试剂 | 含量 |
A-IRDO-I | 22μL× 48管 |
B-I | 90μL × 1支 |
NG-I | 50μL × 2支 |
PG-IRDO-I | 50μL × 1支 |
◆ 适用仪器
Dhelix-C、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308C等恒温荧光检测仪，ABI 7500，LightCycler480，CFX 96等荧光PCR仪。
◆ 自备耗材和仪器
①灭菌1.5mL或2.0mL离心管；②冰盒；③移液器（0.1-2.5μL，0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；④离心机；⑤涡旋混匀器；⑥金属浴
◆ 注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：模板添加区。
3）第三区：扩增及产物分析区。
★分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
◆ 样品处理
①样品的采集和制备是对虾虹彩病毒检测的重要步骤，为防止交叉污染，应使用一次性消耗品，研钵应经160℃干烤2 h，其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用1%次氯酸钠溶液浸泡。②取样应尽量采取心脏、肌肉、皮下组织、鳃、肝胰腺等组织，对于同一批样品，应多点采集合并后，作为一份样品进行均质，提取DNA。③采样过程应快速完成，将采取的样品放入无菌均质袋中均质成糜状，充分混匀。
◆ 实验操作
1. 模板制备（样本制备区）
建议使用配套水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒系列产品。
2．添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行）
取出所需测试数的已含有反应液的PCR管，将试剂完全解冻，解冻后打开管盖向各管管底分别加入1μL B-I，盖上管盖离心1 min。打开管盖分别沿各管管壁上加入2μL模板，顺序为NG-I、待测样品模板、PG-IRDO-I。盖好PCR管盖后，离心3 min，立即进行PCR扩增反应。
3. 扩增反应（扩增及产物分析区）
①恒温仪器63℃条件下反应30 min。
②若使用荧光定量PCR仪，则荧光基团选择FAM，淬灭基团选择None，将63℃ 15 s，63℃ 45 s作为一个循环，于63℃ 45 s处收集荧光信号，30个循环。
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
结果判定
①仪器自动判定结果，若显示“阳性”，则样品中含有对虾虹彩病毒（IRDO）；若显示“阴性”，则样品中不含有对虾虹彩病毒（IRDO）或含量低于检测限。如在20min~30min间出现曲线上扬而自动判读结果为阴性，可能由于样品含量较低导致，建议对样品进行富集或延长反应时间至45min进行复核。
②在荧光定量PCR仪上，根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线，则样品中含有对虾虹彩病毒（IRDO）；若无“S”型扩增曲线，则样品中不含有对虾虹彩病毒（IRDO）或含量低于检测限。
NG反应管结果显示“阴性”，PG反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。
