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生育酚及其衍生物保护自由基诱导生物大分子损伤的作用

2018.11.12

VE又名生育酚,是生物体内的天然抗氧化剂,广泛分布于谷物、种子、果蔬和动物产品中,具有清除自由基、维持哺乳动物及禽类生育、调节免疫、抑制血小板凝集和黏附等功能。

近年来,一种新的生育酚衍生物——生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)的绿色合成研究备受关注,TPGS是α-TOS的游离羧基与大量聚乙二醇酯化而成,亲水性聚乙二醇极大地改善了TPGS的水溶性,由于其两亲性质,可作为增溶剂、乳化剂、稳定剂等使用。


TPGS已被美国食品药品监督管理局批准为安全的药用辅料,但关于TPGS的生物活性鲜有报道。因此,来自西北农林科技大学食品科学与工程学院的韩静静、田丹丹、高玉星等人对比了VE、α-TOS、TPGS对自由基诱导的生物大分子氧化损伤的保护作用,以及对人肝癌细胞(HepG2细胞)增殖的抑制作用,旨在比较研究VE不同衍生物之间生物活性的差异,探讨其内在机理,为VE及其衍生物在食品中的广泛应用提供一定的理论依据。







1. VE、α-TOS和TPGS对自由基诱导蛋白质损伤的影响




 1.1 VE、α-TOS和TPGS对Cu2+ /H2O2诱导BSA氧化降解的影响 



VE对Cu2+ /H2O2诱导的BSA氧化降解没有明显规律性。而α-TOS、TPGS均浓度依赖性地抑制了BSA的氧化降解,在500、1000 μmol/L浓度下,α-TOS和TPGS的抑制作用显著。相同浓度下(500 μmol/L),与VE、α-TOS相比,TPGS对Cu2+ /H2O2诱导的BSA氧化降解的抑制作用最明显,与模型组相比差异极显著(P<0.01)。



 1.2 VE、α-TOS和TPGS对AAPH诱导BSA氧化降解的影响



VE、α-TOS和TPGS均能显著抑制AAPH诱导的BSA氧化降解,在10~500 μmol/L浓度范围内呈浓度依赖性,并且在500 μmol/L时最强,在1000 μmol/L时有所减弱,但与模型组相比仍有极显著差异(P<0.01)。相同浓度(500 μmol/L)处理时,TPGS的抑制作用最明显,且与空白组相比没有显著差异,即500 μmol/L的TPGS很好地抑制了AAPH诱导的BSA氧化降解。



 

1.3 VE、α-TOS和TPGS对Cu2+ /H2O2诱导BSA羰基化的影响



BSA本身羰基化程度很低,在Cu2+ /H2O2作用下发生明显的羰基化修饰。加入VE、α-TOS和TPGS后,BSA羰基化程度明显受到抑制, 且抑制作用随浓度的升高而增强。相同浓度(500 μmol/L)的VE、α-TOS和TPGS均能显著抑制BSA羰基的产生,但TPGS抑制作用最明显。



 

1.4 VE、α-TOS和TPGS对AAPH诱导BSA羰基化的影响



AAPH诱导BSA发生明显的羰基化修饰。VE、α-TOS和TPGS均浓度依赖性地抑制BSA羰基化修饰。500 μmol/L的VE、α-TOS和TPGS均显著抑制了BSA羰基的产生,其中TPGS对AAPH诱导的BSA羰基化损伤的抑制作用最明显。




2. VE、α-TOS和TPGS对自由基诱导LA过氧化的影响


 

2.1 VE、α-TOS和TPGS对Fe2+/VC诱导LA过氧化的影响



LA在自然条件下自氧化反应很慢,生成TBARS浓度较低,Fe2+/VC反应体系诱导LA发生过氧化反应,VE、α-TOS和TPGS均显著抑制了LA过氧化,且其抑制作用随浓度的升高而增强。相同浓度(500 μmol/L)下,TPGS对LA过氧化的抑制作用最强。



 

2.2 VE、α-TOS和TPGS对AMVN诱导LA过氧化的影响



LA自然条件下生成的TBARS浓度很低,AMVN诱导LA发生过氧化反应,TBARS浓度极显著增加(P<0.01)。VE、α-TOS和TPGS均浓度依赖性地抑制了LA过氧化。相同浓度(500 μmol/L)的VE、α-TOS和TPGS中,TPGS对AMVN诱导的LA过氧化的抑制作用最强。



 

2.3 VE、α-TOS和TPGS对AAPH诱导DNA氧化损伤的影响



hsDNA在AAPH诱导下发生氧化损伤。随着加入VE、α-TOS和TPGS浓度的增加,其对DNA氧化损伤的抑制作用增强。相同浓度(500 μmol/L)下,TPGS对AAPH诱导的DNA氧化损伤的抑制作用最强。



 

2.4 VE、α-TOS和TPGS对HepG2细胞活力的影响



以空白组细胞存活率为100%,VE对HepG2细胞存活率没有明显影响;而随着α-TOS、TPGS浓度的增加,HepG2细胞存活率逐渐下降,与空白组相比差异极显著(P<0.01),其中TPGS对HepG2细胞增殖抑制作用最强。



结 论



通过腹腔注射D-半乳糖(100 mg/(kg•d))诱导致衰老小鼠为对照组,羊肚菌菌丝体多糖和羊肚菌菌丝体锌多糖(320 mg/(kg•d))为治疗组。30 d后检测小鼠肝脏、肾脏和血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量,研究羊肚菌菌丝体多糖体内抗氧化作用。羊肚菌菌丝体多糖和羊肚菌菌丝体锌多糖清除羟自由基半数抑制浓度(IC50)分别为0.56 mg/mL和0.36 mg/mL;清除超氧阴离子自由基IC50分别为0.62 mg/mL和0.46 mg/mL;清除DPPH自由基IC50分别为0.68 mg/mL和0.58 mg/mL。羊肚菌菌丝体锌多糖能够提高衰老小鼠肝脏中SOD和CAT活力,显著降低MDA含量(P<0.05),与羊肚菌菌丝体多糖组相比使SOD活力提高了9.32%,CAT活力提高了36.73%,MDA含量降低了90.71%。羊肚菌菌丝体锌多糖具有更强的抗氧化活性,并在设定的质量浓度范围呈剂量效应关系。


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