四大酵母培养基的配置原理和方法
实验概要
了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。
实验原理
麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。
主要试剂
1. 葡萄糖
2. 蔗糖
3. NaN03
4. K2HP04
5. KCl
6. MgSO4·7H2O
7. FeS04
8. 琼脂
9. 新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等
主要设备
1. 仪器：天平、高压蒸汽灭菌锅。
2. 玻璃器皿：移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。
实验步骤
1. 麦芽汁培养基的配制
1) 培养基成分
新鲜麦芽汁一般为10-15波林。
2) 配制方法
a. 用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。
b. 取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。
c. 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 ml，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。
d. 用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6.4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。
e. 如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。
f. 分装、加塞、包扎。
g. 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
2. 马铃薯葡萄糖培养基的配制
1) 培养基成分
马铃薯 20g
葡萄糖 2 g
琼脂 1.5-2g
水 100ml
自然pH
2) 配制方法
a. 配制20％马铃薯浸汁 取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml。80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。
b. 配制时，按每100 ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。
c. 分装、加塞、包扎。
d. 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
3. 豆芽汁葡萄糟培养基的配制
1) 培养基成分
黄豆芽 10g
葡萄糖 5g
琼脂 1.5-2g
水 100ml
自然pH
2) 配制方法
a. 称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100 ml水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。
b. 配制时，按每100 ml10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2 g琼脂，继续加热融化，补足失水。
c. 分装、加塞、包扎。
d. 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
4. 察氏(czapck)培养基的配制
1) 培养基成分
蔗糖 3g
NaN03 0.3g
K2HP04 0.1g
KCl 0.05g
MgSO4·7H2O 0.05 g
FeS04 0.001 g
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
自然pH
2) 配制方法
a. 称量及溶化 量取所需水量约2／3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、NaNO3 、K2HP04 、KCl、MgSO4。依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培养基加入1ml 0.1％的FeS04溶液。
b. 定容 候药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。
c. 加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
d. 分装、加塞、包扎。
e. 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
