关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

影响DNA分子在琼脂糖凝胶电泳仪中泳动度的因素

2019.12.14

影响DNA分子在琼脂糖凝胶电泳仪中泳动度的因素有DNA分子性质、琼脂糖凝胶浓度、电场强度和缓冲液离子强度等。

一、DNA分子性质:

DNA分子性质包括DNA分子电荷数、大小和空间构型等。

1DNA分子电荷数:

一般来说,分子的电荷密度越大,泳动度越大。但不同核酸分子的电荷密度大致相同,因此对泳动度影响不大。在中性或碱性时,单链DNA与等长的双链DNA的泳动度大致相同。

2、、DNA分子大小:

对于线形分子,分子量的常用对数与泳动度成反比。

用标准样品进行电泳并测定其泳动度,然后用DNA分子长度(bp)的负对数对泳动距离作标准曲线,可测定未知分子的长度。

3DNA分子空间构型:

DNA分子空间构型对泳动度影响很大。如质粒分子的泳动度大小顺序为共价闭环DNA>直线DNA>开环双链DNA

二、琼脂糖凝胶浓度:

不同浓度的琼脂糖凝胶构成的分子筛的网孔大小不同。选择不同浓度的凝胶,可分离不同大小的DNA分子。

琼脂糖凝胶适合分离长度为200bp50kbDNA分子。

三、电场强度:

电场强度高,电泳迁移加快。但琼脂糖凝胶的有效分离范围随着电压的增大而减小。

四、缓冲液离子强度:

核酸电泳常采用TAETBETPE三种缓冲系统,各有利弊。


推荐
关闭