影响DNA分子在琼脂糖凝胶电泳仪中泳动度的因素
影响DNA分子在琼脂糖凝胶电泳仪中泳动度的因素有DNA分子性质、琼脂糖凝胶浓度、电场强度和缓冲液离子强度等。
一、DNA分子性质:
DNA分子性质包括DNA分子电荷数、大小和空间构型等。
1、DNA分子电荷数:
一般来说,分子的电荷密度越大,泳动度越大。但不同核酸分子的电荷密度大致相同,因此对泳动度影响不大。在中性或碱性时,单链DNA与等长的双链DNA的泳动度大致相同。
2、、DNA分子大小:
对于线形分子,分子量的常用对数与泳动度成反比。
用标准样品进行电泳并测定其泳动度,然后用DNA分子长度(bp)的负对数对泳动距离作标准曲线,可测定未知分子的长度。
3、DNA分子空间构型:
DNA分子空间构型对泳动度影响很大。如质粒分子的泳动度大小顺序为共价闭环DNA>直线DNA>开环双链DNA。
二、琼脂糖凝胶浓度:
不同浓度的琼脂糖凝胶构成的分子筛的网孔大小不同。选择不同浓度的凝胶,可分离不同大小的DNA分子。
琼脂糖凝胶适合分离长度为200bp~50kb的DNA分子。
三、电场强度:
电场强度高,电泳迁移加快。但琼脂糖凝胶的有效分离范围随着电压的增大而减小。
四、缓冲液离子强度:
核酸电泳常采用TAE、TBE和TPE三种缓冲系统,各有利弊。
推荐