Agrisera公司抗体常见问题问答（一）
1. 问：多克隆抗体的优势是什么?
答：多克隆抗体能够同时识别具有多种不同表位的抗原，具有能够容忍抗原微小的改变如聚合或轻微的变性。检测变性蛋白质多克隆抗体是理想的选择。
2. 问：血清中的多克隆抗体的具体浓度是多少?
答：最常见的是，血清中特异性抗体浓度变化是0.05-0.2 mg/ml (基于Agrisera通过数以百次亲和纯化的内部评估)。在特殊情况下，较好的多克隆血清能包含特异性抗体1- 3 mg/ml的血清(甚至更多)。
3. 问：单克隆抗体的优势是什么?
答：单克隆抗体仅能识别一种抗原表位，这在某些情况下可能是个缺点，如免疫沉淀反应和用于免疫亲和柱时。单克隆抗体作为一抗用于检测组织中抗原是非常好的。理论上与多克隆抗体相比他们应该具有更低的背景，但并不总是这样。单克隆抗体具有较高的同质性，
结果具有高度可重复性 (如果其他实验条件可以保持不变)。
4. 问：当选择一个肽用于免疫原，什么是重要的?
答：通常蛋白的C 端或N端是蛋白质中暴露机会最高的部分。另外，为了模仿蛋白的行为，合成的肽应该有类似于蛋白质"cut out off"后的结构和电荷。
因此：
----来源于C端的多肽那么N端应用乙酰化修饰
----来源于N端的多肽那么C端应用酰胺化修饰
----来源于内部序列的多肽则需要肽的两端都修饰
下面的几点因素也在考虑范围内：
----你感兴趣的蛋白家族里是否有其他的蛋白质，应该避免交叉反应的发生。
----蛋白的结晶结构（或同源蛋白）已知吗？这将有利于研究肽的科学家找到最好的用于抗体生产的肽。
----生产的抗体的最终应用？天然的或变性的技术？
5. 问：什么样的抗原(s)可以用于注射?
答：天然蛋白，重组蛋白，多肽碳水化合物或其他微生物、细菌、病毒提取物可用于免疫接种，需要大小为5 - 10 kDa的小分子诱导充分的免疫反应，有生物毒害的材料禁止用于免疫接种。
重要提示：
----如果抗体作用于变性的靶标蛋白 (例如：免疫印迹、固定组织免疫组化)，变性的抗原是首选(如凝胶块， 包涵体蛋白质)。
----如果使用的抗体的目标蛋白质是天然蛋白(例如：免疫沉淀反应)，非变性的抗原是首选(蛋白质溶解在不含变性剂的溶液中)。
----并不是所有anti-peptide抗体都能识别天然蛋白质，因此谨慎选择肽序列是至关重要的。
----通过重组蛋白在细菌表达体系诱导所制备的抗体在某些情况下无法识别天然蛋白质。原因可能是在细菌细胞中表达的蛋白质抗原发生错误的折叠。
不能保证用于任何的免疫反应中都能得到很好的成功。
相关参考文献：
"Monoclonal antibodies： principles and practice" by James W. Goding， 1996， ISBN 0-12-287023-9;
Publisher： Academic Press. Using Antibodies： A Laboratory Manual， E.Harlow and D.Lane， 1999， ISBN： 0879695447;
Publisher： Cold Spring Harbor Laboratory Press. Hjelm et al. (2012).
Parallel immunizations of rabbits using the same antigen yield
antibodies with similar， but not identical， epitopes. PLOS ONE.
6. 问：用于免疫接种的抗原需要多少量?
答：这取决于抗原的免疫原性。在标准试验方案中(对于兔、山羊或母鸡)我们使用：大约500µg肽/动物/ 15周龄，约400µg蛋白质/动物/ 15周龄。？
如果所选动物抗原和抗体之间的关联性较低，免疫接种时较少量的抗原(少于10µg)也是可以接受的。我们还可以使用自己的免疫方案。如果蛋白质需要浓缩，请注意，在某些情况下，在浓缩设备中蛋白会部分附着在膜上从而部分蛋白质损失。
7. 问：为什么抗原诱导反应只会产生一些IgM抗体?
答：由于缺乏T细胞刺激(Goding ，1993)，高度保守的哺乳动物蛋白质的响应往往很薄弱，主要导致IgM抗体的产生，不过，也有例外。如果是保守的哺乳动物抗原，则使用亲源关系远的物种如母鸡。
8. 问：用于免疫接种的抗原应如何制备?
答：抗原应溶解在缓冲溶液(Tris， MOPS， Hepes)。不溶性抗原(包涵体)和可溶性的一样好。理想的抗原浓度是1mg/ml，然而较低浓度也可以接受的。
您也可以把含有目标蛋白的 SDS-PAGE胶发给我们，将胶放于水中变脱色，因为醋酸能使得蛋白质进一步地变性。
避免：对动物有毒的添加剂，如蛋白酶抑制剂如PMSF、叠氮化钠等等。可接受：低量的SDS、咪唑、尿素、胍，非离子型去污剂，EDTA或EGTA和聚丙烯酰胺。添加的最终的量在很大程度上取决于样本体积/抗原浓度。请查询。
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