唾液淀粉酶活性的观察(2)
（三）操作
1．唾液淀粉酶应用液的制备
（1）每人取一个干净的饮水杯，装上蒸馏水。
（2）先用蒸馏水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净。
（3）口含约20ml蒸馏水，做咀嚼动作1~2min，以分泌较多的唾液。然后将口腔中的唾液吐入一个干净的小 烧杯中[注1]。
（4）取一块干净的白瓷板，按下表操作：
|
穴号 试剂（滴） |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 蒸馏水（ml） | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 弃去 |
| 唾液[注2]（滴） | 2→ | 2→ | 2→ | 2→ | 2→ | 2→ | |
| 0.5%淀粉溶液（ml） | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | |
| 碘液[注3]（滴） | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
观察结果（颜色），以呈棕红色者浓度为准，稀释原唾液作应用液。
2．温度对酶活性的影响[注4]
（1）取3支 试管，按下表进行实验。
| 试管编号 | 1 | 2 | 3 |
| 0.5%淀粉（ml） | 5 | 5 | 5 |
|
PH6.8缓冲液（ml）
|
0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 稀释唾液（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 不同温度（℃） | 置冰 水浴中 | 置37℃水浴中 | 置沸水浴中 |
将各管中的试剂加好后混匀，然后及时在上述温度下分别进行处理。
（2）在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加2滴碘液。
（3）每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。
（4）待第2支试管中的反应液与比色板孔穴的碘液混合后颜色不再变化时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1~3滴。
摇匀后观察并记录各管颜色，比较管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响。
3．PH对酶活性的影响
（1）取3支试管，按下表编号进行实验。
| 管号 | 1 | 2 | 3 | |
| 0.5%淀粉（ml） | 2 | 2 | 2 | |
|
不同PH的缓冲液（ml） |
PH5.0 PH6.8 PH8.0 |
2 | — | — |
| — | 2 | — | ||
| — | — | 2 | ||
| 稀释唾液（滴） | 10 | 10 | 10 |
摇匀后，将各管置于37℃水浴中处理[注5]。
（2）每隔1min从PH6.8的试管中取出1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴，观察其颜色变化。
（3）待颜色呈棕色时，向各管中加稀释碘液1~3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，解释PH对酶活性的影响。
4．酶反应的特异性
（1）取2支试管，按下表编号后进行实验。
| 试管号 | 1 | 2 |
| 0.5%淀粉（ml） | 2 | — |
| 0.5%蔗糖（ml） | — | 2 |
| 稀释唾液（ml） | 1 | 1 |
（2）摇匀后，将各管置于37℃水浴中处理10min。
（3）取出试管，分别加入斑氏试剂2ml，混匀。
（4）将各管置于沸水浴中煮沸2~5min。观察并解释结果。
5．激活剂与抑制剂对酶活性的影响
（1）取3支试管，按下表编号后进行实验。
| 管号 | 1 | 2 | 3 |
|
0.5%淀粉（ml）
|
3 | 3 | 3 |
| PH6.8缓冲液（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 1%NaCl溶液（ml） | — | 1 | — |
| 1%CuSO4溶液（ml） | — | — | 1 |
| 蒸馏水（ml） | 1 | — | — |
| 稀释唾液（ml） | 1 | 1 | 1 |
（2）将各管摇匀后，一起放入37℃水浴中保温。
（3）每隔1min从第1支试管中取出1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴于此滴反应液中，观察其颜色变化。
（4）待加碘后颜色呈棕色时，取出3支试管，分别加入稀碘液1~3滴。观察、比较各管颜色的深浅，并解释之。
注：
[1]可以根据实际情况，用纱布或滤纸过滤一下收集滤液使用。
[2]加唾液时，只在第1穴中加入2滴新制备的唾液。将之与该穴中的蒸馏水混匀后，取出2滴加入第2穴中。待混匀后又从第2穴中取出2滴加入第3穴。如此继续操作，直到从第6穴中取出2滴弃去。待穴中颜色呈红棕色时，即可照该穴中唾液的稀释度稀释制备的唾液，并用稀释好的唾液进行下面的实验。
[3]在往白磁板的孔穴内依次加完蒸馏水、稀释好唾液并且加完淀粉溶液之后，加入碘液之前，应放置5min。
[4]为确保实验的效果，在加入试剂时宜在冰浴条件下进行，尤其是气温较高的南方地区要注意。
[5]加唾液时应从第1管开始依次进行，前后管之间大约相隔时间5~7s。
