乙肝ELISA检测中HBeAg和抗-HBe双阳性原因分析
乙型肝炎病毒HBeAg阳性，表明病毒复制活跃、传染性强，与HBsAg同时阳性发生肝癌的危险系数增加60倍，抗-HBe阳性说明病毒复制减少，传染性弱。近年来，普遍使用ELISA一步法，在工作中遇到HBeAg和抗-HBe双阳性的少见模式，为了分析这一现象，笔者进行了研究，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 本院门诊和住院患者1910例，其中63例初筛模式为HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc4项阳性。
1.2 试剂和仪器 （1）ELISA试剂盒、HBeAg和抗-HBe为上海科华生物技术有限公司产品，批号分别为:20040316、20040516，酶标仪MK-2型、洗板机均为芬兰雷索公司产品。HBeAg样品吸光度值/临界值（S/N）≥2.1判阳性，抗-HBe以抑制率>50%判阳性。（2）微粒子酶免分析（MEIA），使用美国雅培公司试剂和美国AXSYM全自动酶免发光分析系统。抗-HBe采用竞争法，以样本荧光速率值与临界荧光速率值之比（S/N）≤1.0判阳性。
1.3 方法 （1）初筛:一步法，严格按说明书操作，每加5份血清加入酶标抗体。分别检测HBeAg、抗-HBe。（2）复核:溶血标本重抽血，脂法患者禁脂3天后抽血;血块收缩不良，分离不完全标本，经3000r/min10～15min的离心。HBeAg用一步法和微粒子酶免分析。抗-HBe用改进二步法和微粒子酶免分析法，改进再二步法为先加入50μl血清37℃水浴30min，洗涤3次，加酶标抗体37℃水浴30min，再严格按说明书操作。
2 结果
初筛63份HBeAg和抗-HBe双阳血清。经复核:18份HBeAg阴性，抗-HBe仍阳性，45份抗-HBe阴性，HBeAg仍阳性。18份HBeAg阴性标本为溶血和分离不完全标本，初筛与复检吸光度（A值）比较明显下降，差异有非常显著性（P<0.001），见表1。45份抗-HBe复核阴性标本中，一步法与改进2步法吸光度（A值）比较，吸光度值上升，二者差异有非常显著性（P<0.001），见表2。 表1 HBeAg初筛与复检吸光度值比较（略） 表2 3种方法测定血清抗-HBe水平比较（略）
3 讨论
有学者提出HBeAg和抗-HBe双阳是HBeAg向抗HBe转化的过渡阶段 ［1］ 。本次试验与以上理论不完全相符，双阳性结果是假阳性所致，可能的原因为:溶血标本释放大量过氧化物酶活性的血红蛋白，产生干扰。血块收缩不良，分离不彻底，血清中混有过氧化物酶成分，对HBeAg产生正干扰 ［2］ 。脂浊致抗-HBe干扰主要考虑乳糜微粒引起，它造成血清黏度增大的运动速度减慢或产生屏蔽效应，抗原抗体结合几率下降，最终显色降低，产生假阳性。一步法对抗-HBe易产生前带现象，若血清中有大量HBeAg，使固相HBeAb-HBeAg-HBeAb-HRP生成减少，显色下降产生假阳性。二步法的第一步洗涤洗掉多余HBeAg，可消除有效的假阳性。一步法若加入血清放置时间过长，再加酶标抗体也会产生抗-HBe假阳性 ［3］ 。二步法试验有3份抗-HBe仍为阳性，限于条件有限未能研究，可能是抗-HBe和抗-HBc互相干扰所致，或者是AFP、RF、补体、自身抗体、抗大肠杆菌抗体等的干扰［4］ 。
综上所述，HBeAg和抗-HBe双阳多为操作不规范和一步法影响因素造成。工作中可用一步法复核HBeAg，改进2步法复核抗-HBe，抗-HBe仍阳性采用美国雅培公司MEIA法复核可有效消除假阳性的产生。
参考文献
1 朱忠勇.实用医学检验学.北京:人民军医出版社，1992，900-901.
2 赵友云，刘光中，马煜南.酶免疫检测HBeAg假阳性原因分析.临床检验杂志，2000，18:263.
3 腾龙，陈钢，洪加林.酶免疫竞争一步法检测乙型肝炎病毒抗-HBe影响因素探讨.中华医学检验杂志，2003，26:111.
4 黄云英，刘瑜.建立乙肝免疫五项无效试剂.临床二级评价方案的探讨.现代医学检验杂志，2002，17:30-32.
