中压制备小窍门：如何增加上样量？
在实验过程中，合成领域的小伙伴经常需要将小量制备样品进行放大。如何进行放大？怎样放大？下面我们来简单探讨下。
通常，放大样品有两种方式：一是按比例放大、二是柱超载。
按比例放大，即采用更大内径的分离柱，通过增加流速、增加柱长来增加进样量。该方法的优点是可保持样品的浓度不变，因此峰型依然符合高斯曲线，峰型尖锐，对称性好，如下图所示：
图1 12g分离柱上样量200mg
图2 120g分离柱上样量1g
图1 采用12g反相C18柱，进样量200mg；图2采用120g反相C18柱，进样量1g。
按比例放大法的缺点：更大的色谱柱增加了色谱柱成本，也增加了溶剂成本。由于中压制备操作中效率和成本比较重要，因此，中压制备通常不采用该方法。
其次，柱超载法，通常指在分离条件不变的基础上增大进样量。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。超载进样的程度取决于分离情况。超载一般分为体积超载和浓度超载。
在样品溶解性较好的前提下，通常采用浓度超载，即进样体积不变、增加样品浓度，峰型从高斯曲线对称变为三角形，峰展宽较小，分离效果较好。
当样品溶解性较差时，通常采用体积超载，即增加进样体积。采用该进样方式，当超过一定进样体积后，峰高将不再增加，峰型变宽并呈矩形。
在制备液相中，浓度超载的进样方式比体积超载更好，如下图所示：
图3 体积超载
图4 浓度超载
图3和图4 对比可看出浓度超载分离效果更好，能分离的样品量更大
上述内容涉及到一个概念：样品溶解度，先科普一下样品溶解问题。
首先，样品溶解应尽可能选用流动相来溶解样品；其次，选择样品溶于不同于流动相的溶剂，但用此法时需很谨慎，尤其在体积过载的情况下。如果是某种晶型难溶，可加入其他溶剂（如丙酮等）助溶；有时加入少量二氯甲烷，也有助于改善样品的溶解性；如果不是蛋白质等大分子，也可试一下DMSO（在反相不保留且洗脱能力较弱）或DMF，对溶解不好的小极性分子更常用的是THF/H2O，最好每次只加一种溶剂试溶；如果是多肽类样品，可尝试调一下PH值，常常会得到较为满意的效果。
注意事项：当样品溶解在高比例强溶剂中，上样体积一定要小，否则就会不保留。因为大量强极性的样品溶剂会破坏柱平衡，有时会看到陡的前沿和长拖尾，甚至同一样品出两个峰。
