qpcr加完样可以放4°冰箱吗
qpcr加完样可以放4°冰箱。qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样,要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度一般在80-150bp之间,所以只需要变性和退火就可以了。
一般来讲,进行qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。
制度须知
通常来讲,10微升反应体系的10nM引物浓度加0.2微升左右就可以模板如果是总RNA一般是10ng-500ng,如果是cDNA,通常情况下是1微升或者1微升的10倍稀释液。
要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用MasterMix、模板和引物的不同进行优化,以达到一个最佳反应体系。
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