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qpcr加样后能放多久

2023.8.01

qpcr加样后能放一天。

qpcr加完样可以放4°冰箱。qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样,要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度一般在80-150bp之间,所以只需要变性和退火就可以了。

一般来讲,进行qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。

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检测方法:

1、SYBRGreenⅠ法:

在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

2、TaqMan探针法:

探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。


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