D-荧光素钾盐使用方法及常见问题解答
D-荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物，存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下，D-荧光素钾被氧化，产生蓝绿色的光(560nm)，当底物过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、细菌、哺乳动物细胞的常用报告基因。由于没有背景干扰，因此可以很容易地检测出低至0.02 pg 水平的荧光素酶。
D-荧光素钾盐可使luc标记基因和荧光素酶融合蛋白在活细胞、组织和生物体的表达成像，广泛应用于报告基因的分析、免疫测定和卫生监控。
化学名称：4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt
CAS 号：115144-35-9
分子式：C11H7N2O3S2K
分子量：318.42 g/mol
纯度：99.7 %（HPLC）
应用
体外荧光检测：荧光素的配制
试剂：
D-荧光素钾盐（Gold Biotechnology catalog ID: LUCK）
分子生物学级水
培养基
操作步骤：
1、 用分子生物学级水准备一个30mg/L（200×）的储存液。
a． 反复巅倒翻转直到荧光素完全溶解。
b． 可以现配现用，或者分装好保存于-20℃。
2、 加配好的荧光素储存液到预温的组织培养基中，使荧光素的终浓度为：150ug/ml。
3、 吸出培养细胞（没有培养基残留）。
4、 在成像前立即加入150ug/ml的荧光素溶液到细胞中。
a． 为了加强信号，在成像前可以把培养好的细胞在37℃中短暂的孵育。
小鼠活体内荧光检测：荧光素的配制
试剂：
D-荧光素钾盐（Gold Biotechnology catalog ID: LUCK）
DPBS不含Mg2+和Ca2+
操作步骤：
1、 溶荧光素于DPBS中终浓度为：15mg/ml。
2、 用0.2um 滤膜滤灭溶液。
3、 每个小鼠每克体重注射10ul（15mg/ml）荧光素储存液。
4、 成像前10-15min内注射小鼠腹腔内。
a．应用于每个动物模型的荧光动力学研究，以确定峰值信号时间。
关于D-荧光素钾盐的常见问题回答：
1、 荧光素可以用于动物活体吗？
答：我们许多客户用荧光素作用于动物活体，目前世界上合成荧光素主要有两大生产商，因此目前您使用的就是这两种生产商其中之一生产的。请注意：Promega出售的荧光素是Beetle Luciferin，而我们公司出售的是Firefly Luciferin，但这两种的结构是相同的（结构式如下）。
2、 怎么溶解荧光素？溶解后怎样使它稳定？
答：许多客户已经告诉我们荧光素溶于水中，然后分装好保存于-80℃，不会有重大的影响。然而，关于溶解后荧光素的稳定性也有相矛盾的报道。对于大多敏感的实验，为了减少一些实验中的可变因素我们强烈建议您现配现用（比如低浓度的酶或者不合适的反应温度或不合适的盐浓度等等可能需要高浓度的底物来驱使反应的完成。）
