支气管肺泡灌洗术(bal)的检查过程
检查操作
1、术前3-4h禁食。术前30min肌注地西泮（安定）10mg及阿托品0.5mg。
2、2%利多卡因鼻腔、气道局部粘膜麻醉。
3、纤维支气管镜经鼻腔插入气管，嵌入右肺中叶或左肺舌叶段支气管管口（局限性肺病变应选相应支气管肺泡段），注入2%利多卡因2-3ml局麻后，用50ml注射器将37℃生理盐水分次注入，每次25-50ml总量100-300ml，注入后立即通过负压吸引装置吸引、回收至硅质灌洗液收集瓶内。一般回收液量应达注入液量的40%-60%。
4、回收液用双层无菌纱布过滤，除去粘液，记录总回收液量，装入硅质容器中，置于冰水（-4℃）中送检验室，应在2-3h内对灌洗液进行检查、分析。
支气管肺泡灌洗术细胞学检查方法
（1）BALF细胞总数和分类计数检测
①将上述回收灌洗液装入塑料离心管内以1200r/min，在4℃下离心10min，上清（原液或10倍浓缩）-70℃储存，用做可溶性成分的检测。
②经离心沉淀的细胞成分用Hank液（不含Ca2+、Mg2+）在同样条件离心冲洗2次，每次5min。弃去上清后加Hank液3～5ml制成细胞悬液。也可以用灌洗液原液减少细胞丢失。
③然后在改良的Neubauer计数台上计数BALF中细胞总数，一般以1×106/ml表示。如果细胞数过高时，再用Hank液稀释，调整细胞数为5×106/ml，并同时将试管浸入碎冰块中备用。
④细胞分类计数，采用细胞离心涂片装置，加入备用细胞悬液（细胞浓度为5×106个/ml）100μl，在4℃下以1200r/min离心10min，通过离心作用将一定数量的BALF细胞直接平铺于盐载玻片上。取下载玻片立即用冷风吹干，置于无水乙醇中固定30min后进行染色，一般用Wright或HE染色。
⑤在40倍光学显微镜下计数200个细胞，进行细胞分类计数。
（2）BALF中T淋巴细胞亚群的检测
①采用间接免疫荧光法，将上述获得的BALF细胞成分，用10%小牛血清RPMI 1640培养液3～5ml制成细胞悬液。
②将细胞悬液倒入平皿中，置于5% CO2 37℃培养箱中孵育2h，进行贴壁处理，去除肺泡巨噬细胞。
③取出细胞悬液，再用Hank液冲洗离心1次，弃上清留20～100μl。经贴壁处理后的细胞悬液中，肺泡巨噬细胞显著减少，淋巴细胞相对增多。
④将经贴壁处理的细胞悬液分装3个小锥形离心管内，每管20～30μl，用微量加样器向标本中加单克隆抗体CD3、CD4和CD8各20～40μl，混匀置于4℃冰箱中作用1～2h。
⑤取出标本，先用Hank液冲洗离心2次，以12000r/min离心20s，然后加羊抗鼠荧光抗体各20～40μl，置于冰箱作用30min。
⑥取现标本用Hank液以同样速度和时间离心冲洗2次，弃上清留20μl充分混匀细胞，取1滴于载玻片上加盖玻片。荧光显微镜下数200个淋巴细胞并计算出标有荧光的细胞阳性率。
