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蛋白浓度测定方法

2018.12.07

  微量凯氏定氮法:由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白质溶液在280nm处具有紫外吸收高峰。在一定浓度范围内,蛋白质溶液在此波长处的吸光度与其浓度呈正比关系,因此利用这一性质可进行蛋白质定量测定。微量凯氏定氮法迅速、简便、不消耗样品、低浓度盐类不干扰测定,可测定0.1~1.0mg/mL的蛋白质溶液。

  样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例,其反应式如下:

  CH2COOH

  | + 3H2SO4 ? 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)

  NH2

  2NH3 + H2SO4 ? (NH4)2SO4 (2)

  (NH4)2SO4 + 2NaOH ? 2H2O +Na2SO4 + 2NH3 (3)

  反应(1)、(2)在凯氏瓶内完成,反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行。

  为了加速消化,可以加入CuSO4作催化剂,K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液,滴定则用强酸。计算所得结果为样品总氮量,如欲求得 样品中蛋白含量,应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量,即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。


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