如何阅读基因载体图谱？（一）
基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。
一、载体分类及载体组成元件
载体分类
1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体
病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体或是细胞培养中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。用于基因治疗和疫苗的病毒载体应具备以下基本条件：
（1）携带外源基因并能包装成病毒颗粒；
（2）介导外源基因的转移和表达；
（3）对人体不致病；
（4）在环境中不会引起增殖和传播。
非病毒载体一般是指质粒DNA。
2、按进入受体细胞的类型分类：原核载体、真核载体、穿梭载体（含原核和真核2个复制子，能在原核和真核细胞中复制，并可以在真核细胞中有效表达）。
3、按功能分类：克隆载体、表达载体
克隆载体：具有克隆载体的基本元件（Ori，Ampr，MCS等），可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并克隆和大量扩增DNA片段（外源基因）的载体。
表达载体：克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA顺序）有关的元件即成为表达载体。
载体组成元件
1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。
2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+
（1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。
（5）hygr：使潮霉素β失活。
3、多克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段，它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。还要再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
4、P/E：启动子/增强子
5、Terms：终止信号
6、加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用
示例阅读载体：
pENTER载体
1）human ORF + pENTER载体
2） CMV启动子，T7启动子
3） ORF的C端融合了Flag和His tag
4) 多克隆位点，常用AsisI 和 MluI(人源基因上不常见的)
4） SV40 poly（A）加尾信号
5） SV40启动子启动的puro标记
6） 2个腺病毒ITR序列和2个与腺病毒Ad5同源的序列，可用于将ORF序列同源重组到腺病毒载体，直接用于腺病毒的生产。
慢病毒载体
1）EF1a启动目的基因（可添加小标签FLAG或HIS等小标签）
2）CMV启动GFP，非融合抗性筛选标记Puro（便于做细胞株的稳筛）
3）WPRE（来自土拨鼠肝炎病毒的转录后调节元件），放置在目的基因的上游，能加强转基因的表达
4) cPPT（来自HIV-1整合酶基因），增加慢病毒在宿主基因组的拷贝数，提高病毒滴度
5）第三代慢病毒载体，载体中还包含HIV-1基因组中的顺式调节元件(ψ 包装 信号和LTR 长末端重复序列，其中3’LTR增强子功能缺失，5’LTR中U3区替代为CMV，更加安全的病毒载体)
腺相关病毒载体
AAV表达载体包括了中两个ITR + CMV（可替换其他组织特异性启动子，见改造载体部分）+ globin intron 内含子序列 + 目的基因 + poly A序列
