间充质干细胞的冻存
实验概要
间充质干细胞的冻存
主要试剂
DPBS、0.05%胰蛋白酶胰蛋白酶、间充质干细胞培养液、冻存液
主要设备
培养皿、15 mL离心管、冻存管、程序降温盒
实验步骤
(1)37℃预热间充质干细胞培养液和0.05%胰蛋白酶,4℃预冷冻存液。
(2)同间充质干细胞传代第(2)~(5)步。
(2)弃掉旧培养液,加入室温放置的DPBS洗一遍,尽可能将残留的培养液洗净,吸去DPBS。
(3)加入适量(盖住皿底即可)0.05%胰蛋白酶,37℃培养箱内孵育消化2~3 min。
(4)倒置显微镜下观察细胞变圆、漂起,可加等量间充质干细胞培养液终止消化。
(5)轻柔吹打细胞,收集细胞悬液到15 mL离心管中,室温1000 r/min离心3 min,弃上清。
(3)加入4℃预冷的冻存液,吹打混匀。
(4)分装入事先写好细胞信息(细胞名称、代次、细胞量、冻存人、冻存日期等)的冻存管。
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